一种适宜春兰快速增殖培养基组合物及其方法.docVIP

一种适宜春兰快速增殖培养基组合物及其方法技术领域 本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及兰科植物春兰组培苗的优化 培养基配方及其快速繁殖方法。 背景技术 春兰(cymbidium goeringii)，别名小叶青，属兰科植物，分布于中国江苏、 浙江、湖北、贵州、四川、广东、福建等省，主要产地在大盘山、天目山，是 名贵珍稀濒危药用植物资源，性寒，味淡;清肺止咳，治支气管炎，解毒消肿， 活血止痛，软坚散结；外用治毒蛇咬伤，痈疖疮疡；另外，斑叶兰叶片十分美 丽，可作观赏植物栽培，十分精美，有宝石兰之称。巾于其用途广泛、药效显 著，经药农大肆采掘，己处于濒危境地。 春兰种子构造非常简单，极其细小似灰尘，人们至今还没有发现比它更小 的种子，没有胚乳，只有薄薄的一层种皮和少数供自己生长、发育需要的养料， 所以它的生命力很弱，极易夭折，用这些种子来繁衍后代，几乎是不可能的。 斑叶兰在自然界一般靠无性繁殖，但繁殖率很低，加上人为肆意采挖，故己濒 临灭绝。兰科植物应用植物组织培养技术进行快速育苗，已有成功的例子，如 大花蕙兰、蝴蝶兰等，大花蕙兰主耍是利用其腋芽多的特点进行腋芽组培获得 成功，蝴蝶兰主要采用无菌播种技术，再经原球茎分化幼苗途径大量获得试管 苗。但大家知道，兰科植物组培经原球茎分化幼苗途径存在种性易分化，后代 不整齐，和多一道原球茎增殖环节，延长一个繁殖阶段(30?45天)，增加了生 产成本。斑叶兰虽属兰科植物，但至今尚未见有组培成功的报道；斑叶兰从种 子结构到植株生长发育对光、温、水、肥、气均有一定的要求，所以无论是组 培育苗还是组培苗移栽，如何摸索创造条件以满足斑叶兰植物对上述因子的特 定要求，是组培成功的关键。 发明内容 本发明目的是克服以上存在不足，提出一种适于春兰组织培养的优化培养 基配方；本发明的另一目的是提出春兰应用该配方进行快速、低成本繁殖组培 优质苗的方法。 本发明提出的适于春兰组织培养的优化培养基，由基本培养基及分别适用 于不同组培阶段的培养基组成，各培养基添加物含量为： 基本培养基：选用MS培养基或改良MS培养基(1/2MS)，该培养基蔗 糖或白糖20?30 g/L,琼脂7?9g/L，pH为5.0?6.0; 诱导培养基：MS+6-BA2.0?5.0 mg/L + NAA 0.1 ?0.5mg/L 或 IBA0.1 ? 0.5mg/L； 增殖培养基：MS+6-BA2.0?5.0 mg/L + NAA 0.1 ?0.5mg/L 或 IBA0.1 ? 0.5mg/L； 壮苗培养基：MS+6-BA0.2?2.0 mg/L + NAA 0.1 ?0.5mg/L 或 IBA0.1 ? 0.5mg/L； 生根培养基：MS 或 1/2MS + IBA0.1 ?0.5 mg/L 和 NAA 0.1 ?0.5 mg/L 及 活性碳1 g/L中的任意一种、二种或三种的混合物。 所述斑叶兰优化组培培养基，其基本培养基与各阶段培养基添加物含量为: 基本培养基：MS或1/2MS,其中蔗糖30g/L，琼脂7 g/L，pH5.4； 诱导培养基：MS+6-BA3.0 mg/L+IBA 0.5mg/L; 增殖培养基：MS+6-BA3.0 mg/L +NAA0.5mg/L； 壮苗培养基：MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L; 生根培养基：1/2MS+ NAA0.5mg/L + IBAO.5mg/L + 活性碳 1 g/L； 斑叶兰应用上述组培培养基进行快速组培繁殖的方法，包括如下步骤： 外植体的选取与灭菌：取斑叶兰茎尖、茎段、叶柄、叶片或根，经灭菌处理 后备用； 诱导培养：在无菌条件下将外植体切段或切片接种在诱导培养基上，经 30天左右直接从外植体诱导出初代幼芽或丛芽； 增殖培养：在无菌条件下将初代幼芽或丛芽接种在增殖培养基上，培养 30?45天分化出大量继代幼芽或丛芽； 壮苗培养：将继代幼芽或丛芽接种到壮苗培养基中，约30天后，幼苗长 高、叶片长大，株高和叶面积可增加3?5倍。 生根培养：将生长达2?5厘米的继代幼芽或丛芽接种到生根培养基中， 约20?30天后，幼苗基部长出数根根系； 组培苗的驯化与移栽：将生长达3?7厘米以上的培养瓶生根幼芽苗或丛 芽苗，移至常温下适应3?5天后，打开盖子再适应3?5天，洗清根部培养基 后移栽入树皮碎块或其它基质中。 本发明的有益效果是： 提出的斑叶兰组培优化培养基针对性强、适用性好，由于提高了细胞分 裂素浓度，芽的诱导率达90%以上；芽的增殖率每个培养周期达3?5倍，年组 培苗生产能力可达100万苗以上(一年为8个培养周期)；经增设的壮苗培养基 培养后成苗生长速度加快，20?30天苗高可达2?5厘米，生根率达100%;移 栽成活率90%以上； 2） ，该方法巾于提高了细胞分裂素浓度并加强前