热变性法提纯羊血SOD最适条件研究.pdfVIP

第31卷第1期 农业科学研究 2010年3月 V01．3lNo．1 of Sciences Mar．2010 JournalAgricultural 文章编号：1673—0747(2010)01一0044一03 热变性法提纯羊血SOD最适条件研究 于 颖， 张 洁， 徐桂花 (宁夏大学农学院，宁夏银川 750021) Dismutase，SOD) 摘要：采用热变性法，研究不同的热变温度、时间以及方式对提纯羊血超氧化物歧化酶(Superoxide 的影响．结果表明，随着温度的升高和处理时f-I的延长，酶活性和杂蛋白均呈下降趋势．提纯羊血SOD的最适热变性 温度为55℃，变性时间为15min，热变方式为添加体积分数为1．5％的质量浓度为0．01mol／L的CuCl2． 关键词：羊血；SOD；热变性 中图分类号：Q814．1 文献标志码：A Dismutase，SOD) 超氧化物歧化酶(Superoxide 锅：江苏省医疗器械厂生产．PHS-828pH计：成都 是广泛存在于耗氧微生物和动植物中的金属酶[1]． 全速科技有限公司生产．SZ-97自动三重纯水蒸馏 能够清除超氧阴离子自由基，有效地防御活性氧对 器：上海亚荣生化仪器厂生产．可调式移液器：上海 生物体的毒害作用[2]，因而具有极其重要的药用价 仪器有限公司生产． 值．目前已开发和正在开发的SOD资源有动物血 1．3方法 液、刺梨、麦叶、果蔬及微生物等[3]．动物血液是国内 1．3．1SOD活性的测定SOD活性的测定采用微 外生产SOD的主要资源，最常用的是牛、猪的血 量的联苯三酚自氧化法[6]． 液[4]，用羊血生产S()D的研究较少[5]．热变性法虽1．3．2蛋白质质量分数的检测蛋白质质量分数 然操作简便，成本低廉，但是存在条件不明确、稳定 的检测采用考马斯亮蓝法[7|，以牛血清白蛋白作为 性差、除去血红蛋白效果较差等问题．为此，对热变 标准蛋白． 性法提纯羊血SOD的最适条件进行了研究． 1．3．3粗酶提取液的制备新鲜羊血和体积分数 为0．38％的柠檬酸三钠溶液按体积比1：7混合， 1材料与方法 000 搅拌均匀，以4 r／min离心20min，除去黄色血 1．1材料 浆，收集红血球．红血球用2倍体积的生理盐水洗涤 羊血：采自宁夏农垦贺兰山清真牛羊产业(集 3遍，加入等体积的去离子水，4℃条件下搅拌 30 团)有限公司．邻苯三酚：天津市化学试剂三厂生产． min，4℃冰箱过夜，次日溶血液缓缓加入预冷的 三羟基氨基甲烷：上海蓝季科技发展有限公司生产． 0．25倍体积的体积分数为95％的乙醇及0．15倍体 min，4000 乙二胺四乙酸：广东汕头市西陇化工厂生产．牛血清 积的氯仿，搅拌15min，静置30 r／min离 ,5,20 白蛋白：上海伯奥生物科技有限公司生产．氯化钠、 min，上清液即为粗酶提取液． 柠檬酸三钠、氯化铜等为分析纯．无水乙醇、丙酮、氯 1．4热变性去除杂蛋白质