海藻糖合成酶的固定化分析-应用化学专业论文.docxVIP

广西大学硕士论爻《海藻耱合成酶的固定托研究》海藻糖合成酶的固定化研究 广西大学硕士论爻《海藻耱合成酶的固定托研究》 海藻糖合成酶的固定化研究 摘要 障i藻穰在自然界中广泛存在于低等植物、细菌、真菌、酵母、昆 虫及无脊椎动物中，在许多情况下，该糖是昆虫斑糖的童要成分。海 藻糖愚～种非特异性的保护剂，似乎对所有的生物分子鄱其有一定的 保护功能。它可以保护生物膜、蛋白质、嚣旨质体及敏感细胞壁免受干 旱、冷冻、渗透压的燮化等造成的伤害，由于这黧独特的生物学功毹， 海藻糖在工业上可用于不稳定食品、化妆品和医药的保存。r7 本深透霞的在于罨技一条可行的海藻糖生产途径一固定纯酶法。 具体的步骤包括：1、从土壤中分离获得菌株Gx一0012，产生一种 海藻耱合成酶，能转诧麦芽糖合成海藻糖，迸一步研究表裙该酶是一 种胞内酶。2、将菌株GX--0012进行大量的培养，富集发酵菌丝体， 经超声破碎、浸提、离心惹获褥辍酶滚。3、粗酶渡经硫酸铵分缀沉 淀后，收集相应的活性部分，用葡聚糖凝胶进一步纯化，通过电泳来 测定海藻糖会成酶的纯度和分子量。4、将粮酶液瘸壳聚糖凝胶固定 化，制得固定化酶，闯定化酶的活性分析是通过测定固定化酶妁麦芽 糖反应瑟混合物孛熬海藻蕤含量寒实现的。 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定结果显示，该海藻糖含成酶有两条 泛基爨，测定宅{|、】驰分子量分别必55000Da和50000Da。 f研究表明制备固定化酶最佳的条件是：戊二醛的浓度为0．596； 交联豹Ptt值为8。O；交联的遗度为15℃；交联的最佳时闽为12小时； 液态酶与壳聚糖凝胶的质量比为l：1，按此条件制备的固定化酶反应 麴活性最高，生成的海藻糖量最多，海藻糖的最离含量龛是达到40％左 右。另外，固定化酶转化麦芽糖为海藻糖的最佳反应时间为18小时， 这时可以获褥最高含量的海藻糖。。j_ 另外通过离效阴离子色谱仪、商效液耜色谱仪、旋光仪、傅立时 红外光谱仪、液质联用仪几种测试手段，最终可以确认：海藻糖合成 酶能够将麦芽糖转仡为D一(+)一海藻糖，即逡然界中存在最多的 (．a，a)型海藻糖。 关键词：海藻糖；海藻糖合成酶；分离K哆昔化i性质；” 固定化海藻糖合成酶 ￡堡苎兰堡主堕塞茎查垩燕全壅矍煎望奎兰!三壁垄兰 ￡堡苎兰堡主堕塞茎查垩燕全壅矍煎望奎兰!三壁垄兰 ～—— Study on the Production of Trehalose synthase by Immobilized Enzyme Abstract Trehalose exists in nature widely,including lower plants，alga, bacteria，fungi，yeasts，insects，and invertebrates．In most cases trehalose is the major sugar in the blood of insects．Trehalose is an specific protectanL which seems to protect all biological molecules．It can protect biological membranes，proteins,liposomes，and sensitive cytoderms etc。 from damage due to drought，freezing and osmotic pressure changes． Because of its distinctive biological functions，trehalose may possibly have various industrial applications such as a preservative material for unstable food，cosmetics and medicines． On the basis of them my studies is carrying on in order to find one efficient way of actual industrious production—immobilized enzyme method。Concrete step include：1．separate a kind of bacterium Gx一 0012 from soil and produce trehalose synthase enzyme and transform maltose to trehatose，following study find that trehalose synthase enzyme is a kind of en