可控酶解葡甘露低聚糖的制备与其凝胶应用基础研究-植物学专业毕业论文.docxVIP

西南科技大学硕士研究生学位论文 西南科技大学硕士研究生学位论文 第1页 摘要 本课题在“十一五”国家科技支撑计划项目《魔芋葡甘聚糖规模化 加工和应用关键技术》(批准号：2007BAE42804)的资助下，以我国 丰富可再生的天然魔芋葡甘聚糖为原料，研究了工业化的13．甘露聚 糖酶对天然魔芋葡甘聚糖的降解过程中各水解因素对降解产物的影 响，并据此制备出各个分子量段的降解产物，对降解产物的凝胶机理 和应用做了初步研究。研究结果如下： (1)在13．甘露聚糖酶催化降解魔芋葡甘聚糖的过程中，通过单 因素试验，研究得出该13．甘露聚糖酶催化降解魔芋葡甘聚糖反应的 最适温度为50℃，而分子量分散系数则随温度的增加先增加后减小； 降解反应的最适pH为7．5，在pH较低时，分子量分散系数变化不大， 当pH在最适pH附近时，分子量分散系数增加；由于13．甘露聚糖酶 活性很高，因此酶浓度对降解产物分子量的影响十分敏感，而分散系 数则随酶液浓度的增加而减小；降解反应中，分子量分散系数随底物 浓度的增加而减小，而降解产物的分子量的变换则逐渐变小；降解反 应中，降解产物的分子量和分子量分散系数都随时间的增加而减小， 最后趋于平稳。在单因素的基础上，通过正交试验得出，在降解反应 过程中，各水解因素对降解产物分子量的影响顺序是：酶浓度底物 浓度pH温度时间；对降解产物的分子量分散系数的影响顺序 为：酶浓度温度pH底物浓度时间。 (2)课题以尿素作为解胶凝剂，研究了乙醇沉淀法提纯和制备不 同分子量MH．KGM粉体的技术，探讨了酶解底物浓度、尿素浓度、 醇洗次数、烘干温度等条件对MH．KGM粉体产率的影响。结果表明， 酶解底物浓度1．5％，尿素浓度1 0％，醇洗次数3次，烘干温度50℃ 时产物得率最高。 (3)红外分析结果表明，降解后不同分子量MH．KGM与天然 KGM具有相同的红外吸收峰：XRD分析结果表明，不同分子量 MH．KGM与天然KGM具有相似的弥散峰，都属于非晶相，但峰的位 置和强弱稍有不同，表明分子量不同对MH．KGM粉体的聚集态结构 有一定影响，随分子量降低，峰位向低衍射角偏移；热重分析结果表 明，天然KGM、MH．KGM B、MH．KGM A的失重温度分别是2 1 8℃、 225℃和270℃，而三者的50％失重温度为309℃、3 OO℃和3 34℃； 西南科技大学硕士研究生学位论文 西南科技大学硕士研究生学位论文 第1I页 电镜分析结果表明，不同分子量MH．KGM粉体表现出比天然KGM 粉体更加疏松、多孔的特征，且分子量越低，这种特征越明显。 (4)通过高级旋转流变仪和凝胶渗透色谱．静态光散射联用仪 (SEC-MALLS)测定魔芋MH．KGM的分子量、相关分子参数和流变 性质。SEC．MALLS分析结果表明，随MH．KGM分子量的下降，均 方根旋转半径迅速减小，相对刚性参数13从0．3 8增加到0．80，即分 子链由半柔顺性链向短小的刚性链转变。’流变分析结果表明，所形成 凝胶的储能模量G。和耗能模量G¨均随着MH．KGM相对分子量、 MH．KGM浓度和碱浓度的增加而增加，损耗因子tanfi则相应减少， 即形成凝胶的弹性和稳定性增加。 (5)不同分子量MH．KGM与聚丙烯酸互穿网络凝胶作为药物载 体应用时，由于较低分子量MH．KGM粉体的多孔性质使二者的互穿 网络更加致密，有利于载药和释药的稳定性。溶胀分析表明 KGM／PAA．IPN在pH 7．4时的溶胀率明显大子pH 2．2时的溶胀率， 即具有pH敏感性， 且由分子量较大的MH．KGM组成的 KGM／PAA．IPN凝胶的溶胀率、失重速度和失重率都明显大于由分子 量较小的MH．KGM组成的KGM／PAA．IPN凝胶。 不同分子量的MH．KGM具有不同的理化性质。目前对未降解的 魔芋葡甘聚糖的性质已有比较全面深入的研究，但苦于不能得到各个 阶段分子量的MH．KGM，所以对不同分子量的MH．KGM的研究仅停 留在极少数个分子量段的研究，远不能满足实际生产所需要的理论和 参数支撑，对MH．KGM的进一步应用造成了屏障。因此，能够实现 天然KGM的可控降解，系统性地得到各种不同分子量范围的 MH．KOM产品，对魔芋资源的进一步开发利用和应用范围的推广是 一个关键问题。 关键词：魔芋葡甘聚糖；B．甘露聚糖酶；分子量；酶促水解；凝胶 机理；药物载体 西南科技大学硕士研究生学位论文 西南科技大学硕士研究生学位论文 第1 I I页 Ab S t r a et The research was supported by the proj ect of the Key Technology RD Program of China‘‘The scale treatments and applicati