BDFACSCalibur流式细胞仪培训手册.docxVIP

BD FACSCalibur 流式细胞仪 FACS101 Handbook 本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。如希望进一步了解流式细胞技术 应用，请至本公司网站订阅 FACSinformation 电子报 .tw/bdb/index.html 。 如需要本课程手册，欢迎至本公司网站下载 .tw/bdb/10-5-3-1.html 。 如需要免疫荧光染色方法，请至本公司网站下载 .tw/bdb/10-5-4-1.html 。 一、 BD FA CSCalibur 基本结构 1.1 仪器本体： 电源开关：在 BD FACSCalibur 仪器右侧下方，先启动仪器本体，再打开计算机。 光学系统： BD FACSCalibur 基本配有一支波长 488 nm 的氩离子雷射 BD FACSCalibur 基本型为例 FSC Diode 只收 488 nm 波长散射光 SSC PMT只收 488 nm 波长散射光 FL1 PMT 荧光光谱峰值落在绿色范围（波长 515-545 nm ） FL2 PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围（波长 564-606 nm ） FL3 PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围（波长 650 nm ） FACS101 Handbook - 1 – 仪器面板： 仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。 流速控制： LO ： 样品流速： 12 l /min MED ：样品流速： 35 l /min HI: 样品流速： 60 l /min 功能控制： RUN：此时上样管加压，使细胞悬液从进样针进入流动室。（正常显示绿 色；黄色时表示仪器不正常，请检查是否失压。） STANDBY ：无样品或暖机时之正常位置，此时鞘液停止流动，雷射功率 自动降低。 PRIME ：去除流动室中的气泡，流动室施以反向压力，将液流从流动室冲 入样品管，持续一定时间后，以鞘液回注满流动室。 PRIME 结束，仪器 恢复 STANDBY 状态。 储液箱抽屉： 在主机左下方之储液箱抽屉。可向前拉开，内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤 器 Sheath Filter ，及空气滤网 Air filter 。请注意气路减压阀 VENT TOGGLE 之位置。 FACS101 Handbook - 2 – 鞘液筒：位于抽屉左侧，容积 4 升。装八分满鞘液筒，仪器可以运行大约3 小时。筒上装有液面感应器，鞘液用完时，仪器软件上会有显示。鞘液筒盖 上有金属环扣，保证鞘液筒密闭。 废液筒：位于抽屉右侧，容积 4 升。筒上装有液面感应器，废液盛满时，仪 器软件上会有显示。注意废液可能有潜在的生物传染性。 鞘液过滤器： 0.22 m 过滤器，去除鞘液中的杂质，保证进入流动室的鞘液是干净的。 气路减压阀：沿箭头方向移动阀门开关，鞘液筒减压，气压恢复正常。在鞘液筒添加鞘液时，需要减压。 空气过滤网：用于过滤冷却雷射的空气。 上样品区： 上样品区是样本管的上样位置。它包括三个部 分，一个是进样针 Sample Injection Tube ，将 样本输入流动室，还有就是支撑架 Tube Support Arm 、和液滴存留系统 Droplet Containment System 。 进样针：是一根不锈钢管，将细胞从样本针中吸入流动室。进样管外有一套管，是液滴保留系统的一部分。 支撑架：用于支撑样本管、并负责启动液滴存留系统。支撑架有三个位置： 位于样本管之下的中位，样本管左侧或右侧。 液滴存留系统：系统由支撑架、真空帮浦和外套管组 成。当支撑架位于左侧或右侧位置时，真空帮浦就会启 动，将液体从外管吸入废液筒内。上样时，须注意将支 撑架位于中位，以避免过多样品被抽吸到废液筒内（当 支撑架位于中位，真空帮浦停止工作）。更换样品时， 让仪器保持 RUN的模式，使得进样针可以反冲；切换到 STANDBY模式前，确保液路已冲洗彻底以免碎片沈积到 流动室中。 FACS101 Handbook - 3 – 1.2 Macintosh 计算机与打印机： 准备您的细胞样品 1. 理想样品浓度调至 1-10 X 10 5 cells/m l？一般实验只需 0.5 ml 的样品。 2. 细胞样品务必放至 BD FALCON 352052 试管中，否则无法上机。 3. 上机前务必去除样品中之细胞团块，以防止管路堵塞？可使用附滤网 BD FALCON 试管 (Cat. No.352235) 或 35-55 m 的尼龙筛网。 供流式分析的样品是单细胞悬浮液，而且大部分样品都需经荧光染色。表面抗原荧光染色的方法大致有两种：直接免疫荧光、间接免疫荧光染色。研究生可至本公司网站下载染色方法 .tw/bdb/10-5-4-1.html 直接免疫