甲强龙对人胶质母细胞瘤放疗与替莫唑胺同步治疗过程中MGMT表达及放疗敏感性影响的体外分析-临床医学;外科学神外专业论文.docxVIP

天津医科人学硕十学位论文中文摘要 天津医科人学硕十学位论文 中文摘要 胶质母细胞瘤(WHO IV)是颅内最常见的高恶性肿瘤，侵袭能力强、易复发、 患者预后极差。目前胶质母细胞瘤临床治疗方案主要采用手术治疗后给予肿瘤 部位分割照射联合小剂量替莫哗胺(temozolomide，TMZ)治疗，、放射治疗四周后 按照标准方案服用六个周期的替莫唑胺(d1．ds／28d)，胶质母细胞瘤病人的预后 得到改善，但平均生存时间仍仅有1215个月。 高脂溶性、小分子和易于透过血脑屏障的烷化剂，被国内外公认为治疗胶 质瘤的标准化疗药物。替莫唑胺属于第二代烷化剂化疗药，是咪唑四嗪类衍生 物，不经肝脏代谢，可直接在脑胶质瘤组织碱性环境中分解，生成活性物质MTIC (3-methyl．triazenl．y1)imidazole．4．earboxomide， MTIC)，其疗效佳、副作用 小的特点备受临床青睐。然而，肿瘤细胞固有的或获得性的耐药部分地限制了 替莫唑胺的临床治疗效果。肿瘤细胞对化疗药物的耐药性是导致治疗失败的主 要原因之一，肿瘤细胞耐药涉及因素很多，其中06．甲基鸟嘌呤．DNA甲基转移 酶(06-methylguanine．DNA methyltransferase，MGMT)是烷化剂主要的耐药基 因。MGMT是一种DNA修复酶，其可在不需任何辅助因子或其他蛋白质的条 件下催化DNA分子中鸟嘌呤06位上的烷基转移至MGMT本身第145位的半胱 氨酸残基上，使鸟嘌呤复原，DNA的结构和功能得以恢复，从而保护细胞免受 烷化剂的损伤。 肿瘤放射治疗的机制，主要是通过放射线产生的自由基和损伤DNA来诱导 肿瘤细胞凋亡，其有效性已经由多项肿瘤细胞放射线照射治疗研究所证实。有 研究发现联合放、化疗不仅可以利用替莫哗胺代谢产物所产生的细胞毒性和放 疗本身对细胞的杀伤作用，还可利用替莫唑胺对放疗的增敏作用，利用两种疗 法的协同效应，可减少替莫唑胺的使用剂量，增强治疗的疗效。 恶性胶质瘤患者常常伴有严重的瘤周水肿、术后反应性水肿及放疗后脑水 肿。糖皮质激素如甲强龙(methylprednisolone，MP)是治疗脑水肿非常有效的 一类药物。但是，最近的一些研究证实，糖皮质激素对放疗或化疗诱导的细胞 死亡起反作用。我们在前期研究中发现，当把甲强龙单独加入到体外培养的恶 性胶质瘤细胞，对细胞生长几乎无影响；当对肿瘤细胞进行放疗或替莫唑胺化 疗时应用甲强龙，与单独放疗或化疗相比，肿瘤细胞生长抑制明显减弱。因此， 本研究试图弄清甲强龙是否抵抗放化疗的治疗效果，及其诱导肿瘤细胞产生化 天津医科人学硕+学位论文疗耐药及放疗抵抗的机制。目自订尚无甲强龙对替莫唑胺化疗及放射治疗作用影 天津医科人学硕+学位论文 疗耐药及放疗抵抗的机制。目自订尚无甲强龙对替莫唑胺化疗及放射治疗作用影 响的研究报道。 本课题研究分为以下二个部分： 第一部分探讨甲强龙在人胶质母细胞瘤替莫唑胺化疗治疗过程中对MGMT 表达的影响。通过磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B，SRB)法检测细胞存活率， Western Blot及RT-PCR检测MGMT在胶质瘤细胞中的表达情况，加药处理后， 与对照组相比，替莫唑胺组及替莫唑胺+甲强龙组U251细胞的生长在处理24小 时后出现明显抑制(尸O．05)，随时间推移，在替莫唑胺处理组细胞增殖抑制程 度逐步下降，在96h及120h抑制程度下降最明显，而替莫唑胺+甲强龙组细胞 在48h后即出现受抑制程度下降的表现(PO．05)。MGMT在第24h甲强龙组 表达水平明显高于其他各组(PO．05)，替莫唑胺+甲强龙组低于甲强龙组但高 于对照组及替莫唑胺组(尺O．05)，在第120h替莫唑胺+甲强龙组MGMT表达 水平最高(P0．05)。替莫唑胺组MGMT随着时间的延长，表达水平先降低后 增高(尸O．05)，在第120h最高(PO．05)，停药72h后MGMT表达水平下降(尸 O．05)， 替莫唑胺+甲强龙组MGMT具有同样的趋势但表达水平较替莫哗胺组 高(尸O．05)。 第二部分探讨替莫哗胺及甲强龙对人胶质瘤细胞放疗敏感性的影响。通过 SRB法检测放疗后细胞存活率，经流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡变化情况。用 Western blot方法检测凋亡相关基因Bax及Bcl．2蛋白表达的变化。U251细胞在-- 处理后，放疗+甲强龙组细胞存活率明显高于其他实验组(尸O．05)，在24h及 48h放疗+替莫唑胺+甲强龙组细胞增殖率高于放疗+替莫唑胺组(尸O．05)，但 在72h及96h两组之间细胞增殖率差异不明显(PO．05)。细胞凋亡检测显示， 除对照组外各实验组凋亡率均明显升高(尸O．01)。在凋亡率增加的各组中，放 疗+甲强龙组的凋亡率最低(PO．05)，其余三组问