加工番茄抗ToMV转基因技术研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除 文中已经注明引用的内容外 ，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 学位论文版权授权书 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主 管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论 文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题 和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 时间：年月日 时间： 年 月 日 时间： 年 月 日 VI VI 前 言 新疆为全国加工番茄种植面积最大的省区，其番茄酱出口额占新疆出口创汇总额的 13%，是新疆的支柱产业之一。番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus ,ToMV) 是危害新疆 加工番茄的主要病毒之一，在新疆许多地区加工番茄上普遍大面积发生，症状十分复杂， 有的地块发病率高达 100 % ，造成产量下降，甚至绝产。近年来，该病在新疆为害明 显上升，并有逐年加重的趋势，严重影响了加工番茄的果实品质和产量质量。目前我国 主要采用种植传统方法育成的抗病品种和使用农药为主的综合防治措施，然而现有的抗 病作物品种存在育种周期长，抗病性丧失快等重大技术障碍，而化学农药量的剧增导致 病虫害严重抗病性，污染环境，降低番茄品质。 目前，已有报道将病毒外壳蛋白和复制酶基因导入烟草可在一定程度上增强对病毒 的抗性，但其抗性主要在病毒侵染初期，可以推迟发病，但难以有效持久地控制病毒的 危害。随着 RNA i 的机制的逐步被阐明，它的特异性和有效性逐渐被人们所认识，是近 年来迅速发展起来的一项基因阻隔技术，正越来越多的应用于植物抗病毒的研究。RNAi 是由 dsRNA 介导的、在转录后水平关闭相应序列基因表达的过程。由于 ToMV 为单链 RNA 病毒，主要依靠病毒自身编码的 RNA 依赖的 RNA 聚合酶进行复制扩增，因此在 复制过程中都有病毒基因的 dsRNA 形式产生, 这就为利用 RNAi 技术抗 ToMV 研究提 供了条件。 近些年来，已有报道将马铃薯Y病毒外壳蛋白基因部分序列反向重复转化入烟草, 获得对PVY免疫烟草植株；利用TMV、CMV CP部分序列的融合基因片段构建干扰载体， 转化烟草后，获得双抗的转基因植株。而这些利用RNA i技术抗病毒的研究的成功为本 实验的进行提供了依据。本实验中，在成功克隆ToMV序列的基础上，设计合成ToMV 复制酶蛋白和CP特异性RNAi片段，构建ToMV的siRNA的表达载体，载体通过农杆菌介 导法转化烟草，可以通过下一步攻毒试验来验证其是否具有抗ToMV的能力。 加工番茄抗 加工番茄抗 ToMV 转基因技术研究 PAGE PAGE 10 第一章 文献综述 我国加工番茄主要分布在新疆、内蒙古和甘肃。新疆光热资源丰富，昼夜温差大， 气候干燥，非常适宜加工番茄的生长和发育，是世界上适宜种植番茄的少数地区之一。 如今新疆加工番茄的种植面积达 80 万亩，成为全国加工番茄种植面积最大的省区。新 疆加工番茄原料具有质量好、固形物和红色素含量高等特点，适合进行番茄加工。随着 新疆等主产区加工、生产能力的增大和扩大，加工番茄在新疆得到更广泛的种植，新疆 番茄酱出口 67 个国家和地区，占新疆出口创汇总额的 13%，是新疆的支柱产业之一， 对促进新疆农业产业化，增加新疆各族农牧民收入和出口创汇等方面发挥了重要作用。 近年来，随着新疆等主产区种植年限的延长和主栽品种单一的大面种植，栽培技术 的调整，全球气候的变化和病毒的适应性变异等因素的影响，常规品种的优势特征逐年 衰退，品种老化、退化、抗病性差，导致在新疆各加工番茄种植区发生病毒危害有逐年 加重的趋势，发生面积不断扩大，有的田地发病率达 100%[24]，导致常规品种丧失抗性 灾害程度加重，且受害番茄无法正常变红，严重影响加工番茄的果实品质和产量质量。 另外，由于新疆七月份小麦收获后，大量蚜虫迁移到番茄地，造成病毒病爆发，使得晚 播番茄几乎无法收获收成。因此病毒病也是缩短新疆加工番茄收获期的重要因素。面对 番茄病毒病的严重危害，目前我国主要采用种植传统方法育成的抗病品种和使用农药为 主的综合防治措施。然而现有的抗病作物品种存在育种周期长，抗病性丧失快等重大技 术障碍，而化学农药量的剧增导致病虫害严重抗病性，污染环境，降低番茄品质，加重 农民负担，存在安全隐患等问题日趋严重，对我国农业生产产生巨大损失。 目前，经研究检测，TMV、ToMV、CMV 是危害新疆加工番茄