吉非罗齐参与细胞脂代谢调控的分子作用机制研究-生物化工专业论文.docxVIP

吉非罗齐参与 吉非罗齐参与细胞脂代谢调控的分子作用机制研究 PAGE VI万方数据 PAGE VI 万方数据 东华大学学位论文版权使用授权书 学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同 意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允 许论文被查阅或借阅。本人授权东华大学可以将本学位论文的全部或 部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存和汇编本学位论文。 保密□，在 年解密后适用本版权书。 本学位论文属于 东华大学 刘伟伟硕士学位论文答辩委员会成员名单 姓名 职称 职务 工作单位 备注 李震 研究员 答辩委员会主席 上海农科院 李凯 副研究员 答辩委员会委员 东华大学 周宇荀 副研究员 答辩委员会委员 东华大学 孟清 教授 答辩委员会委员 东华大学 杨光 副教授 答辩委员会委员 东华大学 杨雪霞 副教授 答辩委员会委员 东华大学 周兴平 研究员 答辩委员会委员 东华大学 林瑛 副教授 答辩委员会秘书 东华大学 吉非罗齐参与细胞脂代谢调控的分子作用机制研究 摘 要 血脂是血浆中的中性脂肪(甘油三酯和胆固醇)和类脂(磷脂、脂、 固醇、类固醇)的总称，是细胞基础代谢的必需物质。近来，由于饮 食生活不当或者缺乏锻炼造成的肥胖患者越来越多，由此引发的高血 脂症受到广泛关注。常用的降脂药物主要有胆酸结合树脂、他汀类、 烟酸类和苯氧芳酸衍生物。其中吉非罗齐属于苯氧芳酸类，是一种较 新的血脂调节剂，其作用机理主要是抑制极低密度脂蛋白(VLDL)在 肝脏的合成，增加脂蛋白脂酶的活性，促进 VLDL 的分解代谢，从 而降低 TG 和低密度脂蛋白的形成。但其在细胞内对脂代谢的调控机 制尚不清楚，因此我们利用模式生物酵母探究吉非罗齐在细胞内对脂 类代谢的调控机制。 吉非罗齐处理野生型酿酒酵母 by4741a 后，与我们预测相反， TAG 含量和脂滴数目均有显著增加。然后我们逐一检测细胞中性脂 代谢通路中关键基因缺失（pah1△、tgl3△、tgl4△、tgl3△tgl4△、lro1△、 are1△、are2△、dga1△、dgk1△等）后吉非罗齐的升脂效应，对比发 现， DGK1 敲除之后细胞内 TAG 和脂滴数目不再受药物的影响。初 步确定 DGK1p 可能是吉非罗齐细胞内靶向调控的酶。 由于 DGK1p 调控 DAG 生成 PA，因此进一步检测吉非罗齐对细 胞 PA 含量的影响，结果表明其可以抑制 DGK1p 的活性。RT-PCR 检 测吉非罗齐处理显著下调 DGK1 的表达，并且下调依赖于转录因子 TUP1 和 CYC8；随后，实验数据表明吉非罗齐通过 TUP1p-CYC8p 与 DGK1 启动子-TATA-高度保守元件（-400bp—-200bp）结合起调控 作用；同时，发现药物也可以通过上调具有转录抑制作用的转录因子 TUP1、CYC8 基因的表达，增强对 DGK1 基因启动子的抑制作用，从 而降低 DGK1 基因的表达量，进而升高细胞内 TAG 的含量。最后， 我们对 pah1△背景下酵母必需基因超表达文库进行吉非罗齐耐受筛 选鉴定，发现过表达 NAF1、KIN28、RPL15A 等能明显提高细胞的药 物抗性，其中大部分与蛋白质的转录与翻译息息相关，为进一步研究 吉非罗齐通过 TUP1、CYC8 调控 DGK1 对细胞内中性脂肪代谢调节 机制奠定基础。 关键词：吉非罗齐，脂代谢，二酰甘油酯酶，转录因子 吉非罗齐参与细 吉非罗齐参与细胞脂代谢调控的分子作用机制研究 VII VII 万方数据 STUDIES OF MOLECULAR MECHANISM OF GEMFIBROZIL ON REGULATION OF CELLULAR LIPID METABOLISM ABSTRACT Cholesterol is blanket of neutral fat (triglycerides and cholesterol) and lipids (phospholipids, lipids, sterols, steroids) in plasma. And it is essential substances of basal metabolism in living cells. Due to improper diet or lack of exercise, more and more obese patients are appearance, which caused hyperlipidemia increasingly widespread attention.Commonly used lipid-lowering drugs include Bi