基质金属蛋白酶抑制剂调控青光眼术区纤维化的实验研究-眼科学专业论文.docxVIP

林辉的硕士学位论文 林辉的硕士学位论文 导师；王宁利教授 基质金属蛋白酶抑制剂调控青光眼术区 纤维化的实验研究 专业：眼科学 临床科研型硕士生：林辉 指导教师：王宁利教授 摘 要 研究目的：探讨基质金属蛋白酶抑制剂GM6001(Ilomastat)应用于调控青光眼滤过 手术术后纤维瘢痕化的可行性、有效性、安全性及可能的作用机制。 研究方法：1、建立人眼Tenon囊成纤维细胞和I型胶原体外三维培养体系 (fibroblast—populated v／pc I collagen lattices，FPCL)。应用免疫组织化学法、 明胶酶谱法、western blot法分析体系中第1、3、7天成纤维细胞对基质金属蛋白 酶蛋白的表达。2、应用不同浓度的GM6001(100uM、l uM、10nM、0．1nM) 于二维和三维培养的成纤维细胞胶原凝胶体系，观察凝胶收缩情况。明胶酶谱法检 测用药7天后不同浓度组三维培养体系培养液中明胶酶情况。3、观察GM6001最 高剂量组细胞骨架蛋白actin表达变化和透射电镜下超微结构变化。应用MTT法检 测不同浓度GM6001对细胞增殖的影响。4、制作新西兰大白兔滤过手术模型，术 毕即刻以及术后连续9天滤过区旁注射0．1ml的100u M GM6001，同时设单纯手 术组、丝裂霉素组、PBS(含0．4％DMSO)注射组，观察滤过泡形态、眼压及并 发症·『青况。术后12天行单纯手术组及GM6001组角膜内皮检查。病理组织切片观 察2-3周的术区纤维瘢痕化情况。 研究结果：1、成纤维细胞一I型胶原体夕b维共培养体系中在细胞内和培养液中 均可检测到基质金属蛋白酶类的蛋白表达，其中MMP一2表达量多。随着时间进程 中成纤维细胞胶原凝胶的持续收缩，培养液中未活化及活化型MMP．2的量均逐渐 基质金属蛋白酶抑制剂调控青光跟术区纤维化的实验研究增多。2、不同浓度的GM6001对三维培养的成纤维细胞胶原凝胶的收缩具有呈剂 基质金属蛋白酶抑制剂调控青光跟术区纤维化的实验研究 增多。2、不同浓度的GM6001对三维培养的成纤维细胞胶原凝胶的收缩具有呈剂 量效应关系的抑制作用，1001．t M组可以显著性近完全抑制胶原凝胶的收缩；但所 有剂量组对二维培养的成纤维细胞胶原块收缩均无抑制作用。三维培养体系用药7 天后培养液中活化型MMP．2的量与GM6001呈剂量依赖关系，但是单次应用100 u M的GM6001不足以完全抑制共培养7天的三维体系中MMP一2的表达与活化。 3、应用100“M的GM6001 7天后，三维培养物中actin表达量减少，透射电镜下 胞浆内细胞内微管、微丝减少，散在分布，部分细胞器发生变性。1001．t M的 GM6001具有～定抑制细胞增殖的能力，其余各浓度梯度的GM6001对成纤维细胞 增殖没有明显影响。4、单纯手术组和PBS注射组滤过泡约存留1周左右， GM6001滤过泡存留约2-3周，丝裂霉素组滤过泡麓存留3周以上。GM6001组出 现1例用药期间前房出血，该组角膜内皮检查无明显变化。组织切片显示GM6001 组术后14天滤过区存在中等范围的琉松结缔组织，但周边开始发生纤维增殖化， 小血管增生，结膜下有一定程度炎症反应，角膜内皮和视网膜组织没有明显病理性 变化。丝裂霉素组出现结膜上皮明显变薄或缺损和一定程度的炎症反应。 结论；体外成纤维细胞胶原凝胶收缩过程中伴随有基质金属蛋白酶类蛋白的表 达。广谱基质金属蛋白酶抑制剂GM6001能够明显抑制三维培养的细胞胶原凝胶 收缩。GM6001抑制胶原凝胶收缩与细胞毒作用无明显关联，与抑制细胞迁移以及 细胞骨架结构变化有关。兔眼模型中应用GM6001具有一定调控滤过术区瘢痕化 作用，但作用不及丝裂霉素。进一步关于MM：Ps及其抑制剂的研究有望为调控青 光眼滤过术区纤维瘢痕化提供新的途径。 关键词：基质金属蛋白酶，成纤维细胞一I型胶原三维培养体系，青光眼，纤维瘢 痕化，滤过手术 II 林辉的硕士学位论文 林辉的硕士学位论文 导师：王宁利教授 Matrix Metalloproteinase Inhibition Modulates Postoperative Fibrosis in Experimental Glaucoma Filtering Surgery Major：Ophthalmology Master C趴didate：L玳Hui Supervisor：Professor WANG Ning—Li Abstract Purpose：To investigate the effectiveness，safety and mechanism of a broad-spectrum matrix metaUoproteinase(MMP)i