基于转录组测序的绿僵菌MaCdc42调控机制解析-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 HYPERLINK \l _bookmark0 3.3.2 转录组拼接注释18 HYPERLINK \l _bookmark1 3.3.3 基因表达水平的分析19 HYPERLINK \l _bookmark2 3.4 讨论28 HYPERLINK \l _bookmark3 第四章 主要结论及后续工作展望 31 HYPERLINK \l _bookmark4 4.1 主要研究结论31 HYPERLINK \l _bookmark5 4.2 后续试验建议31 HYPERLINK \l _bookmark6 参考文献 32 HYPERLINK \l _bookmark7 附 录 35 HYPERLINK \l _bookmark8 致 谢 47 HYPERLINK \l _bookmark9 攻读研究生期间发表的文章48 HYPERLINK \l _bookmark10 学位论文独创性声明 49 摘要 绿僵菌（Metarhizium acridum）是一种数量较多的侵染性昆虫病 原真菌，具有很强的致病力。前期研究可知绿僵菌中类 Cdc42 基因被 命名为 MaCdc42（Metarhizium acridum Cdc42 ），属于 Rho 家族蛋 白基因。MaCdc42 基因与绿僵菌的极性生长、抗逆机制和致病性密 切相关。为明确 MaCdc42 调控机制，本研究对敲出 MaCdc42 基因绿 僵菌菌株（△MaCdc42）进行转录组测序。分析绿僵菌 MaCdc42 缺 失所引起的基因表达变化，以揭示 MaCdc42 的相关调控机制。研究 结果如下： 1. 转录组测序野生型（WT）菌株的 Clean Reads 为条， 拼接后得到 9316 个基因；MaCdc42 突变体的 Clean Reads 为条，拼接后得到 9339 个基因。 2. MaCdc42 基因敲除导致 1512 个基因的 mRNA 表达水平发生变 化，表达量相对上调的基因为 855 个，相对下调的基因为 657 个，上 调基因数较多。在差异表达基因中变化倍数在 32 倍以上的基因中， 大多包含一些未知功能的假设蛋白基因，例如假设蛋白 MAC_03232 （hypothetical protein MAC_03232）假设蛋白 MAC_06508 基因、假 设蛋白 MAC_04956 基因等，为后续研究提供一定新的数据基础。 3. GO 分析结果显示 MaCdc42 的调控相关的差异基因共 622 个得 到注释，其中 47%（293 个）注释到氧化还原酶活性、水解酶活性、 铁离子结合等分子功能，38%（236 个）注释到定位、阴离子运输等 生物过程，15%（93 个）注释到膜、膜的固有成分、膜组分等细胞组 分。MaCdc42 基因的敲出与绿僵菌的生长发育，细胞骨架形成具有 十分重要的调控作用。 4. KEGG Pathway 分析表明，MaCdc42 基因敲除所引起的差异表 达基因中，共有 935 个差异表达基因富集于 117 个生理生化条目； MaCdc42 基因敲除影响 MAPK -yest 信号通路通路改变，通路上 18 基因表达出现差异，其中上调基因 11 个，下调基因 7 个。MaCdc42 基因的缺失使 MAPK -yest 信号通路中的下游效应因子活性受到抑 制，从而导致绿僵菌细胞生长及细胞分化表现缺陷，生长速度缓慢。 5. 要明确 MaCdc42 在调控网络中所处地位，以及是如何通过其 他基因互作调控着这些绿僵菌的生物学功能尚待进一步研究。 关键词：绿僵菌 MaCdc42 基因敲除 转录组分析 1 Abstract Metarhizium acridum is entomopathogenic fungi, which has a strong pathogenicity. Previous studies showed that the Cdc42 of Metarhizium acridum was named MaCdc42 (Metarhizium acridum Cdc42), belonging to the Rho GTPase. The gene is closely related to the polar growth, anti reverse mechanism and pathogenicity. In our research, we knocked MaCdc42 gene out to clarify the gene regulation mechanism, through judging its growth defect.