基质金属蛋白酶在阿霉素心肌病大鼠左室重构中的作用及PPARγ配体保护作用研究-内科学(心血管)专业论文.docxVIP

华中科技人学同济医学院 华中科技人学同济医学院 博士学位论文 基质金属蛋白酶在阿霉素心肌病大鼠左室重构 中的作用及PPART配体保护作用研究 博士研究生 刘洪智 导 师 曹林生教授 中文摘要 第一部分阿霉素心肌病大鼠模型的建立及评价 目的：建立阿霉素心肌病大鼠动物模型，并对其进行评价。 方法：35只雄性Wistar大鼠随机分两组：正常对照组(CON组，w=lO)和阿霉 素心肌病组(ADR-DCM组，n=25)，ADR．DCM模型建立方法：阿霉素2．5mg／kg， 尾静脉注射，每周一次，连续10周。CON组注射相同体积的生理盐水注射液。12 周时进行超声和血流动力学检测评价其心功能，硫代巴比妥酸法检测丙二醛 (MDA)含量，氯胺T法检测羟脯氨酸及胶原含量，苦味酸天狼星红染色进行左室 胶原特异染色及定量分析，计算胶原容积分数(cvF)，并作HE染色观察其组织学 变化。 结果：ADR-DCM组大鼠死亡率蔓J40％(10／25)，CON组无死亡。ADR-DCM 组大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)及收缩末期内径(LVESD)增加，心功能明显下 降，表现为左室短轴缩短率(Fs)、二尖瓣环收缩期长轴方向峰值运动速度(Vs)、 左室内压最大上升速率(+dp／dtmax)、左室内压最大下降速率(·dp／dt。ax)明显降低， 左室舒张末期压GVEDP)升高(PO．叭)：丙二醛(MDA)含量、羟脯氨酸及胶原 含量增jJH(P0．01)；苦昧酸天狼星红染色显示左室胶原明显增加，胶原容积分数 (CVF)日月显增高；病理学结果证实符合心肌病样改变。 结论：ADR常规剂量多次静脉注射，可致大鼠发生心脏间质纤维化及心脏舒 缩功能降低，成功建立ADR-DCM大鼠动物模型。 关键词：动物模型；大鼠；阿霉素；心肌病 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 溥』二学位论文 第二部分基质金属蛋白酶参与阿霉素心肌病大鼠左室重构 实验一基质金属蛋白酶在阿霉素心肌病大鼠左室心肌中的表达 目的：研究基质金属蛋白酶(MMPs)及金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)在 阿霉素心肌病(ADR．DCM)大鼠左室，Ih,肌中的表达。 方法：35只雄性Wistar大鼠分两组：正常对照组(CON组，n=10)；}nN霉素-th, 肌病组(ADR-DCM组，n=25)。逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠左室 心肌中MMP．2、MMP．3、MMP．9、MMP．13、MTl一MMP、EMMPRJN及TIMP一1 的mRNA表达， Western印迹分析检测MMP．2、MMP．3、MMP．9、MMP．13、 MTl-MMP、EMMPRIN及TIMP．1的蛋白表达，明胶酶谱法检测MMPs活性， 凝胶迁移率变化分析方法(EMSA)检测NF招、AP一1活性。 结果：ADR．DCM组大鼠左室心肌中MMP．2、MMP．3、MMP一9、MMP-13、 MTI—MMP及EMMPRIN的mRNA及蛋白表达较CON组明显升高(_尸O．01)， MMPs明胶酶活性显著增加(尸O．01)，而TIMP．1的表达在两组间均无显著性意 义(尸O．05)。NF．KB、AP一1活性在ADR—DCM组明显增高(Jp0．叭)。 结论：ADR．DCM左室心肌MMPs表达及活性上调，其上调可能与NF—r,B、 AP．1活性增加有关。 关键词：基质金属蛋白酶；金属蛋白酶组织抑制因子；阿霉素心肌病： 核因子一xB；活化蛋白一1 实验二基质金属蛋白酶抑制剂逆转阿霉素心肌病左室重构的研究 目的： 探讨MMPs抑制剂强力霉素能否逆转阿霉素心肌病左室重构、改善 ，th,功能及其作用机制。 方法：60只雄性Wistar大鼠分三组：(1)阿霉素一tt,N病组(ADR—DCM，n=25)t 阿霉素2．5mg／kg，尾静脉注射，每周一次，连续10周；(2)阿霉素心肌病+强力 霉素治疗组(DOx，n=25)，DOX 30mg／kg，每天一次，灌胃治疗；(3)正常对照 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 博士学位论文 组(CON，n=10)。12周时进行超声和血流动力学检测，硫代巴比妥酸法检测丙二 醛(MDA)含量，氯胺T法检测羟脯氨酸及胶原含量，苦味酸天狼星红染色进行左 室胶原特异染色及定量分析，计算胶原容积分数(CVF)，并作HE染色观察其组 织学变化。RT-PCR方法及Western印迹分析检测大鼠左室心肌中MMP．2、 MMP一3、MMP一9、MMP．13、MTl．MMP、EMMPRIN及TIMP—l的mRNA和蛋 白表达，明胶酶谱法检测MMPs活性，凝胶迁移率变化分析方法(EMSA)检测 NF—出、AP一1活性。 结果：DOX组较ADR—DCM组死亡率明显降低(16％vs 40％。P0，01)。与 CON组