急性心肌缺血猝死例左室心肌Cx43脱磷酸化的免疫组化研究-法医病理学专业论文.docxVIP

急性心肌缺血猝死例左室心肌Cx43脱磷酸化的免疫组化研究 急性心肌缺血猝死例左室心肌Cx43脱磷酸化的免疫组化研究 研究生：章诗伟 急性心肌缺血猝死例左室心肌Cx43 脱磷酸化的免疫组化研究 华中科技大学同济医学院法医学系 研究生章诗伟 导师陈新山教授 摘 要‘ 在大部分急性心肌缺血所致的心性猝死，特别是冠心病猝死 的案例中，由于用肉眼观察和常规组织切片H．E．染色镜检常看不 出心肌有明显的病理形态学改变。因此对其死因的明确诊断一直 是法医学及病理学领域研究的重点与难点。长期以来，国内外的 研究人员一直在努力寻找准确、实用的方法和灵敏、特异的指标 来检测缺血后早期心肌梗死的存在。特别是近一、二十年来，应 用免疫组化技术所选择的一些参考性指标如：心肌肌红蛋白Mb、 心肌肌动蛋白HHF35、纤维连接蛋白Fn、补体C5b一9、血管内皮 生长因子VEGF，及某些与细胞凋亡相关的蛋白如c。fos、bcl．2等， 对早期心肌梗死均有一定的形态学诊断意义。 由于急性心肌缺血所致的心性猝死，特别是冠心病猝死，其 死亡机制多系快速室性心率失常(多源性室性异位节律或心室纤 颤)，而以上这些检测指标与心肌缺血时心脏功能(电、机械活动) 的障碍并不直接相关。那么，能否在形态学上找到某类和心脏电、 机械活动，特别是与前者密切相关的指标，且它的异常足以构成 或解释急性心肌缺血时心律失常的发生呢?鉴于此，本课题拟用 免疫组化技术，探讨与人心室肌细胞闰盘上与心电耦联活动密切 相关的缝隙连接蛋白Cx43，其脱磷酸化与心肌缺血、心律失常发 华中科技大学同济医学院法医学系 硕士研究生毕业论文 璺堡：垒坐!丛些茎!!型垄皇：尘些竺兰塑些壁墼垡墼鱼壅塑丝堑塑 璺堡：垒坐!丛些茎!!型垄皇：尘些竺兰塑些壁墼垡墼鱼壅塑丝堑塑 堑窒生；童壁焦 生的关系，并为诊断心肌缺血早期病变提供一种新的比较有价值 的形态学参考指标。 本实验研究从我系法医病理学教研室2000年7月至2002年 12月，所有明确死因诊断的尸检案例中选取45例(死亡至尸检及 组织固定H寸倒36小时=的左心室局部心肌组织存档蜡块(一般 包括：近心尖部前壁或侧壁1块、近心尖部后壁1块以及左室前 内侧乳头肌1块)。按死亡原因并参考各例心脏标本冠状动脉粥样 硬化(AS)病变程度的不同，将所选案例分为，组I：AS病变≥ 3级，且无明显心肌梗死的冠心病猝死组；组11：AS病变2级 的急性失血性休克急死组；组Ill：AS病变／3级的急性失血性休 克急死组；组Ⅳ：AS病交2级的严重颅脑损伤或急性病理性颅 内出血急死组；组V：AS病变≥3级的严重颅脑损伤或急性病理 性颅内出血急死组。应用免疫组化SP技术，选择兔抗人Cx43多 克隆抗体，分别检测各组各例左心室局部心肌组织中Cx43的磷酸 化状态，以推断其电耦联是否脱失。 另外，本实验研究还选用兔抗人心肌闰盘上粘合连接的主要 蛋白Pan．Cadherin的多克隆抗体和能与人心室肌细胞膜上糖蛋白 成分之一的末端非还原型N．乙酰．D一半乳糖(D—OalNAc)发生特 异性结合的生物素化菜豆凝集素(PHA—E+L／Bio)。分别检测心室 肌细胞间机械耦联的稳定性与心室肌细胞膜的完整性(后者采用 亲和组织化学技术)，以便在实验中与Cx43免疫组化染色纬果作 比较分析。各组每张Cx43免疫组化染色切片均应用显微数码成像 与分析系统进行随机多点图像采集，并作半定量分析。图像分析 原始数据导入SAS8．1统计软件，计算各例阳性产物校正灰度值， 求出阳性指数PI。用Bart|ett-z 2法对各例PI值作多样本方差齐性 华中科技大学同济医学院法医学系 硕士研究生毕业论文 急性心肌缺血猝死例左室心肌Cx43脱磷酸化的免疫组化研究 急性心肌缺血猝死例左室心肌Cx43脱磷酸化的免疫组化研究 研究生：章诗伟 检验，然后选择合适的统计推断方法，比较各组Cx43免疫组化染 色阳性指数总均值TMPI之间的差异性。 实验结果表明：(1)．磷酸化Cx43在组I、II和III所有标本中均 明显缺染，在少数标本中呈点状弥散于细胞浆，在两对照组所有 15例标本中，则可见磷酸化Cx43聚集于心肌闰盘处；(2)．五组所 有标本心肌闰盘处，Pan—Cadherin均呈强阳性着色，而且在心肌间 质小血管内皮以及心肌胞浆中也有弱阳性着色；(3)．各组所有标本 的心肌细胞膜均显示良好，细胞轮廓清晰可辨；(4)所有标本Cx43 免疫组化染色阳性指数PI值经Bartlett—z 2检验后，得知各组方差 齐同，因此我们选择LSD．，检验对各组Cx43阳性指数总均值 TMPI作方差分析。结果显示TMPI值在各实验组(组I、II 5阳III) 与对照组(组Ⅳ、V)之问差异性极为显著，P值远小于O．01；