急性淋巴细胞性白血病细胞株中T-型钙通道和钠通道的表达与功能-内科学(血液)专业论文.docx

福建医科大学博士学位论文 福建医科大学博士学位论文 目 录 附录…………………………………………………………………….1 中文摘要………………………………………………………………..2 英文摘要………………………………………………………………..4 第一章 T-型钙通道在急性淋巴细胞性白血病细胞的表达与功能研究 ………………………………………………………………………6 前言……………………………………………………………………...6 1. 材料和方法…………………………………...………………………7 1.1 材料7 1.1.1 标本和细胞株7 1.1.2 主要仪器及产地7 1.1.3 主要试剂及生产厂商9 1.1.4 主要耗材及生产厂家11 1.1.5 溶液的配置12 1.2 方法16 1.2.1 细胞培养、复苏及冻存16 1.2.2 外周血单个核细胞分离17 RT-PCR 和实时定量 PCR 17 Western Blot 21 1.2.5 免疫荧光24 1.2.6 电生理记录25 1.2.7 细胞增殖实验26 1.2.8 T-型钙通道 α1G 和 α1H 基因的敲除 26 1.2.9 细胞周期分析33 1.2.10 细胞凋亡检测33 1.2.11 胞内游离钙的测量34 1.2.12 线粒体膜电位测定35 1.2.13 统计分析36 2. 结果…………………………..…………………………………………36 2.1 T-钙通道在人类白血病细胞株和人外周血单个核细胞的表达 36 2.2 T-型钙通道拮抗剂抑制人急性淋巴细胞性白血病细胞的活力 40 2.3 米贝拉地尔和 NNC-55-0396 通过细胞周期阻滞和细胞凋亡两种 途径抑制急性淋巴细胞性白血病细胞的生长 42 2.4 米贝拉地尔和 NNC-55-0396 下调 MOLT-4 细胞的 ERK 信号通 路 45 2.5 NNC-55-0396 诱发内质网钙释放 47 3. 讨论53 第二章 电压门控钠通道在急性淋巴细胞性白血病细胞的表达与功能研 究…………………………………………………………………………. .57 前言………………………………………………………………………...57 1. 材料和方法…………………………………...…………………………58 1.1 材料58 1.1.1 标本和细胞株58 1.1.2 主要仪器及产地58 1.1.3 主要试剂及生产厂商60 1.1.4 主要耗材及生产厂家61 1.1.5 溶液的配置62 1.2 方法66 1.2.1 细胞培养、复苏及冻存66 1.2.2 外周血单个核细胞分离67 RT-PCR 和实时定量 PCR 67 Western Blot 69 1.2.5 免疫荧光70 1.2.6 电生理记录70 1.2.7 细胞增殖实验71 1.2.8 Transwell 实验 71 1.2.9 统计分析72 2. 结果…………………………..………………………………………….72 2.1 急性淋巴细胞性白血病细胞和人外周血单个核细胞电压门控钠通 道的分子特征72 2.2 电压门控钠通道的电生理学特征74 2.3 电压门控钠通道在淋巴细胞增殖、迁移和侵袭中的作用75 3. 讨论……………………………………………..……………………….76 结论………………………………………………..………………………..78 参考文献……………………………………………..……………………..79 综述……………………………………….……………………………...87 致谢……………………………………….…………………………….101 PAGE PAGE 1 英 文 缩 略 语 表 ALL ER PBMC PI Acute lymphocytic leukemia Endoplasmic reticulum Peripheral blood mononuclear cell Propidium iodide 急性淋巴细胞性白血病 内质网 外周血单个核细胞 碘化丙啶 PERK RNA-like ER kinase RNA-like ER 激酶 UPR Unfolded Protein Response 非折叠蛋白反应 TG Thapsigargin 毒胡萝卜素 CsA Cyclosporine A 环孢素A VGCC Voltage-gated calcium channel 电压门控钙通道 VGSC Voltage-gated sodium channel 电压门控钠通道 KV1.3 Voltage-gated potassium channel 电压门控钾通道 KCa Calcium-activated potassium channel