急性脑损伤大鼠NF-κB表达的动态观察及CCK-8对其抑制作用的研究-外科学专业论文.docxVIP

中文摘要急性脑损伤大鼠NF-K 中文摘要 急性脑损伤大鼠NF-K B表达的动态观察及CCK-8对 其抑制作用的研究 摘 要 目的：颅脑外伤(trauma brain injury,TBI)后继发脑水肿是 危及生命和影响病人预后的一个重要危险因素，伤后引起的 机体炎症反应是造成脑水肿的主要原因。有研究表明炎性介 质、细胞因子的大量表达与脑组织的继发损伤程度密切相 关。核转录因子．v,B(Necular Factor Kappa B，NF．1出)是炎症反 应调节过程中一个至关重要的转录因子，NF．r．B的活化可通 过激起肿瘤坏死因子．a(Tumor necrosis factor-a，TNF．0【’)和白 介素．I(interleukin．1，IL．1)等促炎因子的表达，进而加重颅脑 外伤后的继发性炎性损害。胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK) 是一种典型的脑肠肽，近年来许多学者发现胆囊收缩素．8具 有抑制炎症反应的作用，并作为一种新型的抗炎因子被广泛 应用，但目前国内外还没有将其运用于急性颅脑损伤方面的 研究。为此我们通过建立稳定的大鼠脑挫伤动物模型，观察 NF．KB在脑损伤后脑组织中的动态表达，并对脑损伤大鼠应 用CCK．8，检测挫伤侧脑组织含水量及NF．r,B的表达变化， 对其作用机制进行初步探讨。 方法：成年雄性SD大鼠1 04只，体重250-300 g，随机 分为4组，采用液压打击致伤法制作大鼠脑外伤模型。假手 术组(8只)，大鼠只行颅骨开窗，不做液压打击；损伤组(48 只)，按损伤后时间分为lh、6 h、12 h、24h、72 h、5d六个 亚组，每亚组8只大鼠；CCK．8治疗组(24只)，根据NF．v．B 中文摘要在伤后表达最强的时间三个点12 中文摘要 在伤后表达最强的时间三个点12 h、24h、72h，分为三个亚 组，每亚组8只大鼠。于致伤前30rain，按40 1．t g／kg，经尾静 脉注射CCK-8，0．2ml／只；生理盐水治疗组(24只)，分为伤 后12 h、24h、72h---个亚组，于致伤前30rain注射等量生理盐 水，0．2ml／只，后制作大鼠脑挫伤模型。将动物按时间点断 头处死，取挫伤灶前缘2mm处脑皮质1 00 1．t g，放于．70℃冰箱 保存，采用电泳迁移率改变分析方法(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)检测胞核内NF．rB蛋白的表达，并做光密 度定量分析；另取挫伤灶边缘脑皮质约(200-士50)mg，用干湿 重法测量脑含水量；剩余挫伤边缘脑组织用4％多聚甲醛固 定、脱水、包埋。将脑组织切成4 mm厚薄片，用做苏木精． 伊红染色观察脑组织形态学变化，以及免疫组化方法观察脑 挫伤后不同时间大鼠脑组织表达NF．K B的情况。 结果：1脑含水量变化损伤组大鼠脑外伤后1h损伤侧 脑组织含水量与假手术组相比虽然有所升高，但经统计学分 析无显著性差异，P0．05。从伤后6h开始损伤侧脑组织含水 量较假手术组有所升高，伤后12h脑组织脑含水量明显升高， 24h脑组织含水量达到高峰为(85．70-a：1．41)％，高峰持续到 72h，而后开始下降。5d后明显降低脑组织含水量为 (77．29士1．57)％。CCK．8治疗组各时间点脑组织含水量与 生理盐水治疗组比较，有明显的降低，P0．05，差异具有统 计学意义。 2炎症反应情况假手术组大鼠脑组织无炎细胞浸润。 脑损伤组大鼠伤后1h病变周围未发现明显炎细胞浸润情况， 伤后6h挫伤组织周围开始出现散在的炎细胞，并可见大量 炎性细胞在血管腔内聚集，向外迁移。伤后12 h可见挫伤组 中文摘要织缺血坏死明显，与周围正常组织边界清楚，挫伤周围出现 中文摘要 织缺血坏死明显，与周围正常组织边界清楚，挫伤周围出现 深染的单核淋巴细胞浸润；伤后24h炎性细胞浸润继续多以 单核细胞为主，并可见少量中性粒细胞。伤后72h炎性细胞 大量集聚于坏死组织及坏死组织周边，以分叶核的中性粒细 胞为主，胶质细胞增生明显，在坏死区内开始有新生毛细血 管生成。伤后5d胶质细胞大量增生，残留坏死组织基本被 吸收完全，成纤维细胞增多，炎性细胞较前有所减少。CCK．8 治疗组各时间点脑组织切片经HE染色，可见炎性细胞数量 较损伤组及同时间点生理盐水组有明显减少，神经细胞水肿 及坏死程度也有显著减轻。 3 NF．r,B的阳性表达假手术组脑组织仅有微量NF．r,B 阳性细胞表达。脑损伤组大鼠脑损伤后lh NF．r．B阳性细胞 表达开始增多，阳性细胞数为10．00a：1．52。伤后6h阳性细胞 数明显增加，在挫伤区及挫伤周围脑组织均可见到阳性细胞 表达，阳性细胞数为17．564-2．40。12h阳性细胞急剧增多， 主要