急性髓系白血病CDH13基因启动子甲基化及其表达的分析-内科学(血液病学)专业论文.docxVIP

广州医科大学学位论文 广州医科大学学位论文 急性髓系白血病 CDH13 基因启动子甲基化及其表达的研究 PAGE PAGE 15 急性髓系白血病 CDH13 基因启动子甲基化及其表达的研究 硕士研究生：刘检波 导 师：毛平 教授 专 业：内科学（血液病学） 中文摘要 研究背景 近年来研究表明，DNA 甲基化状态尤其是抑癌基因的高甲基化失表达在白血病的 发生发展、诊断及其预后方面有重要作用。CDH13（T-cadherin, H-cadherin） 基因属于细胞粘附分子钙粘蛋白超家族，作为一种抑癌基因，可使肿瘤生长受到 抑制，在消化道肿瘤、前列腺癌等人类多种肿瘤中因启动子甲基化而沉默，其抑 制细胞生长及促进细胞凋亡的作用丧失。目前 AML 患者骨髓标本 CDH13 甲基化的 研究报道较少。本研究旨在应用焦磷酸测序方法（Pyrosequencing）定量检测 AML 患者骨髓标本 CDH13 基因启动子甲基化水平，应用荧光定量 PCR 技术检测 CDH13 基因 mRNA 的表达,并初步探讨 CDH13 基因甲基化水平与原发 AML 患者年龄、 性别及临床分型之间的关系及 CDH13 基因甲基化对 mRNA 表达的影响，探讨 CDH13 基因在 AML 中的临床意义。 目的：通过检测急性髓系白血病中 CDH13 基因启动子甲基化状态及其对 mRNA 表达的影响，探讨 CDH13 基因在 AML 中的临床意义。 方法：1. 选取 44 例原发初治 AML 患者的骨髓标本作为研究对象，10 例缺铁 性贫血（IDA）患者的骨髓标本作为对照组，10 例健康个体外周血标本作为观察 组，运用焦磷酸测序方法（Pyrosequencing）检测 CDH13 基因启动子甲基化状 态，同时采用荧光定量 PCR 技术检测该基因 mRNA 的表达水平，分析启动子区 域甲基化与基因 mRNA 表达之间的关系。 结果：1. 44 例 AML 中 23 例标本 CDH13 基因启动区高甲基化，阳性率为 52.27%， 而 10 例对照组中 1 例标本 CDH13 基因启动区高甲基化，阳性率为 10.0%；CDH13 基因在 AML 患者中的高甲基化阳性率明显高于对照组（P＜0.05）；CDH13 基因 在原发初治 AML 患者 M2 分型中高甲基化阳性率明显高于其他 5 型（P0.05）。 CDH13 基因的高甲基化与 AML 患者的年龄、性别未发现明显相关性（P0.05）。 2. CDH13 基因 mRNA 表达在原发急性髓系白血病明显低于对照组（P0.05）；， CDH13 基因 mRNA 表达在 AML 的各临床亚型间无统计学差异（P0.05）。3. 在 23 例甲基化阳性患者中，CDH13 基因 mRNA 表达与启动子甲基化呈明显负相关 （P0.05）。 结论： 1.急性髓系白血病中 CDH13 基因启动子区普遍存在异常高甲基化，其可 能是引起 AML 的分子机制之一；2. CDH13 基因 mRNA 表达与启动子甲基化呈 明显负相关,启动子区域的异常甲基化可能影响 CDH13 基因的表达。在基因水平 上验证 CDH13 基因启动子甲基化可能导致 CDH13 基因表达下调或表达沉默。 关键词：急性髓系白血病；DNA 甲基化；CDH13 基因；焦磷酸测序 Studies on promoter methylation and gene expression of CDH13 in Acute Myeloid Leukemia Major:Internal Medicine (Hematology) Postgraduate: Liu Jianbo Supevisor:Professor Mao Ping Department of Hematology,Guangzhou First Municiple People’s Hospital Affiliated to Guangzhou Medical University ABSTRACT Background In recent years, so many studies showed that the DNA methylation especially the hypermethylation of tumor suppressor genes play an important role in the pathogenesis 、diagnosis prognosis of leukemia.The T-cadherin is a kind of tumor suppressor gene which belongs to the cell ad