急性红白血病的基因组学分析-基础兽医学专业论文.docx

中文摘要急性红白血病的基因组学研究 中文摘要 急性红白血病的基因组学研究 急性红白血病的基因组学研究中文摘要 急性红白血病的基因组学研究 中文摘要 II II 急性红白血病的基因组学研究 中文摘要 一、急性红白血病的临床和实验室特征的研究 目的 系统分析自 2003 年至 2014 年在本院诊治的 160 例急性红白血病(AEL）患者 的临床及实验室特点，对比国内外报道，揭示本中心 AEL 患者的特点，并补充完善 国际急性红白血病在细胞遗传学和分子生物方面的研究。 方法 1. 回顾性分析 160 例 AEL 的临床及实验室特点，其中 143 例 AEL、40 例 MDS-E、46 例 MDS 患者的骨髓细胞均采用直接或短期培养法制备染色体，用热变 性 R 显带技术进行核型分析并分别按照 IPSS 和 UKMRC 标准对这些病例进行危险度 分层；其中 158 例 AEL 患者按照 2008 WHO 诊断标准重新分型，并对入组的病例进 行随访，按核型特点等分组进行生存分析。2. 随机选取有初诊、缓解期 DNA 样本的 6 对 AEL 患者进行全外显子测序，60 例初诊 AEL 的 DNA 样本进行 Ion torrent 检测， 结合 PCR 扩增、桑格测序测序法共同检测验证基因突变，并随机选取 7 例初诊 AEL 的 RNA 样本进行基因表达谱芯片检测，分析总结 AEL 患者分子生物学特征。 结果 1. 按照 2001 版 WHO 分型标准，160 例 AEL 患者中 M6a 148 例（占 92.5%）， M6b 12 例（占 7.5%）。男性 92 例，女性 68 例，男/女比例为 1.35:1，中位发病年龄 50 岁（13-83 岁），白细胞计数（white blood cell count，WBC）中位值为 2.7×109/ml （0.52-182×109/ml）,血红蛋白（hemoglobin，Hb）中位值为 74g/L（36-148g/L），血 小板（platelet，PLT）计数中位值为 37×109/ml（4-715×109/ml），骨髓红系前体细胞 百 分 比 中 位 值 60% （ 50%-97.5% ） ， 骨 髓 原 始 细 胞 占 有 核 细 胞 比 例 中 位 值 16% （0.5%-43.5%），骨髓原始细胞占非红细胞百分比中位值 40%（20%-93.5%）。M6a 和 M6b 两种亚型临床表现及外周血象相似，均可累及三系，仅骨髓中红系比例不同。 160 例 AEL 病例中共有 143 例可以进行核型分析。正常核型 86 例，占 60.1%，异常 核型 57 例，占 39.9%，其中复杂核型（累及 3 条及 3 条以上染色体的异常核型）28 例，占 AEL 的 19.6%，占异常核型的 49.1%。M6a 和 M6b 两者的核型分布亦相似， 均以正常核型为主，该点与国外报道不一致，可能与人种和地域性差异有关。 I PAGE IV PAGE IV PAGE III PAGE III 2. 158 例 AEL 按照 2008 WHO 诊断标准重新分型，N-AEL 108 例，AML-MRC 13 例， MDS-AEL 37 例。为进行同期比较，另有 40 例骨髓红系前体细胞≥50%的骨髓异常综 合征（MDS-E）、46 例骨髓红系前体细胞50%的骨髓异常综合征患者（MDS）也入 组研究，比较各组间的临床及实验室特征。各组发病性别分布均为男性多于女性， 血细胞降低可累及三系，N-AEL、AML-MRC、MDS-AEL、MDS 发病年龄较 MDS-E 年轻，N-AEL 外周血象仅血小板较 MDS-E 低，且 P0.05，其他各组间外周血象无 明显差异。N-AEL 和 MDS-E 均以正常核型为主，AML-MRC、MDS-AEL 及 MDS 则以异常核型为主，N-AEL 与 MDS-AEL 间、MDS-E 与 MDS 间核型分布有显著性 差异。 3. 6 对 AEL 病例初诊、缓解期样本分别进行全外显子测序，发现多种再现性基因突 变，其中 GATA2 突变 2 处（33.3%）、CEBPA 突变 4 处（66.7%），为进一步了解 AEL 突变情况，本研究对 41 例 AEL 患者进行 Ion torrent 方法检测 AML 常见的突变 基因，69 例 AEL 患者进行 PCR 扩增及桑格测序法检测 GATA2 和 CEBPA 突变，最 终发现 GATA2 突变 13 例（18.8%），CEBPA 突变 33 例（47.8%），RUNX1 突变 （4.9%）、NPM1 突变（2.4%）、TET2 突变（4.9%）、U2AF1 突变（9.8%）、SETBP1(14.6%) 等。 4.