急性肝衰竭大鼠肝脏树突状细胞TLR4的表达-内科学(传染病)专业论文.docxVIP

温州医学院硕：l二学位论文急性肝衰竭大鼠肝脏树突状细胞TLR4的表达 温州医学院硕：l二学位论文 急性肝衰竭大鼠肝脏树突状细胞TLR4的表达 中文摘要 研究背景： 肝衰竭(Liver failure，LF)是临床常见的严重肝病症候群，治疗较为困难， 病死率极高。其机制目前还没有完全明确，常伴有肠源性内毒素血症(intestinal endotoxemia，IETM)。内毒素(endotoxin，ETX)，即脂多糖(Iipopolysaccha“de， LPS)是革兰氏阴性菌细胞外膜上的糖脂。固有免疫系统是机体抵御细菌，真菌 与病毒等病原微生物的第一道防线。免疫细胞如巨噬细胞和树突状细胞(dendritic cells，DC)通过模式识别受体(pattern recognition receptor，PRR)识别病原相 关分子模式(pathogen associated molecular pattern，PAMP)，帮助清除病原体。 Toll样受体(toll．1ike receptor，TLR)是一种模式识别受体，其中TLR4识别的是 LPS。免疫系统通过TLR4识妄JlJLPS并激活多种转录因子，进而产生大量促炎性细 胞因子，如肿瘤坏死因子．Q(TNF．瑾)和IL一6，以控制入侵病原体的繁殖与传播， 同时还能削弱免疫反应强度。树突状细胞是最主要的抗原提呈细胞，不仅在诱导 初级免疫反应中起着关键作用，而且也可能是诱导免疫耐受的重要因素，还能调 节适应性免疫反应。目前对外周血DC的研究较多，而肝脏DC上TLR4表达情况 的研究少见。因而，本实验拟对急性肝衰竭大鼠肝脏DC的TLR4表达情况进行研 究，探讨肝衰竭的发病机制。 目的： 建立急性肝衰竭大鼠模型，并提取其肝脏树突状细胞，研究其表面TLR4的 表达情况，初步探讨肝脏树突状细胞在肝衰竭过程中的功能变化，及其在肝衰竭 发病机制中的意义与作用。 方法： 1．应用硫代乙酰胺(Thioacetamide，TAA)350mgg分别于Oh、24h进行 腹腔注射制造肝衰竭大鼠模型。 2．通过观察一般情况，病理学检查，肝功能检测来检验大鼠模型的效果。 3．应用磁珠分选的方法提取肝脏树突状细胞，并应用蛋白印迹的方法检测 树突状细胞的TLR4表达情况。 结果： 1．健康对照组大鼠一般情况良好，活动自如，反应灵敏，大小便正常。而 肝衰竭组大鼠，腹腔注射TAA后，出现懒动，进食减少，体重进行性下 降，精神差，嗜睡，对外周刺激反应减弱，尿量减少，尿色加深，部分 有鼻部及注射部位瘀斑，3只于实验前病死。肝衰竭组大鼠肝小叶结构 温州医学院硕：L学位论文紊乱，肝细胞肿胀，可见片状坏死。急性肝衰竭组大鼠血清ALT、AST、 温州医学院硕：L学位论文 紊乱，肝细胞肿胀，可见片状坏死。急性肝衰竭组大鼠血清ALT、AST、 TB较正常对照组明显升高。差异具有统计学意义(t=-1 7．578，PO．Ol， t=．1 8．387，P0．01，t=．11．684，P0．01) 2．经过二步灌流法获得肝脏非实质细胞后(non-parenchymal cells，NPC)， 再行分选柱二次分选，每单只大鼠肝脏可以获得OX62阳性细胞0．7-1．2 ×106个细胞。 3．急性肝衰竭组大鼠血清ETX、IL．10较正常对照组上升，差异有统计学 意义(t--．3．228，PO．01，仁．5．673，P0．01)。 4．急性肝衰竭组大鼠肝脏树突状细胞表面TLR4蛋白表达低于正常对照 组。 结论： 1．通过一般情况，病理学检查，肝功能的表现表明本研究成功复制了急性 肝衰竭大鼠的模型，并进一步获得了所研究的目的细胞。 2．急性肝衰竭大鼠肝衰竭时内毒素含量上升，血清抗炎性因子IL．10产量较 正常对照组升高。 3．本研究表明：急性肝衰竭组大鼠肝脏树突状细胞表面TLR4蛋白表达低于 正常对照组，可能参与了内毒素耐受的形成。 关键词： 急性肝衰竭：大鼠；肝脏；树突状细胞；Toll样受体 6 温州医学院硕：l：学位论文The 温州医学院硕：l：学位论文 The Expression of TLR 4 On the Liver Dendritic Cells in lhts with Acute Liver Failure B扯l【ground： Liver failure(LF)is a common and severe clinical disease with difficuitv of treatment and a very high mortality．Although its mechanism is still not entirely clear． it is associated with intestinal endot