磺胺氯吡嗪钠化学发光免疫分析方法的建立-兽医专业论文.docxVIP

密级： 密级： 论文编号： 中国农业科学院 学位论文 磺胺氯吡嗪钠化学发光免疫分析方法的建立 The Establishment of Enzyme Enhancement Chemiluminescenceumlnescence Immunoassay“lmmunoassay Ior Sullaclll’lorpyrazl‘ne sodium 硕士研究生．张梦 指导教师：王权研究员 申请学位类别：兽医硕士 专业领域名称：兽医 培养单位：上海兽医研究所 研究生院 2015年5月 万方数据 Secrecy： Secrecy： No． Chinese Academy of Agricultural Sciences Dissertation The Establishment of Enzyme Enhancement J1l T IjllemllUmmescence lmmUnoaSSaV lor Sulfachlorpyrazine sodium M．S．Candidate：Meng Zhang Supervisor：Prof．Quan Wang Degree：Master of Veterinary Science Specialty：Veterinary Medicine May 2015 万方数据 独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经 发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位 或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文 中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 张梦 时间： )o古年}月弓。日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业 科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同 方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 研究生签名： 浓慧 时间： 冲心年上月；。日 导师签名：jL击＼ 时间： 2口u一年r月；／曰 万方数据 中国农业科学院 中国农业科学院 硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 论文作者 张梦 专业领域 兽医 研究方向 孱蜥 论文题目 磺胺氯吡嗪钠化学发光免疫分析方法的建立 《喾嚼i獬＼7-I 指导教师 王权 培养单位(研究所、中心) 姓名 职称 单 位 专式}矽＼ ‘奄够 封文海 教授 中国农业大学 兽医 | 评 阅 涂亚斌 副研究员 哈尔滨兽医研究所 兽医 | 人 答 ÷帮． 辩 主 江善祥 教授 南京农业大学 基础兽医学 席 华修国 教授 上海交通大学 预防兽医学 勿卅 李绍顺 教授 上海交通大学 兽药学 ．魂缈 易 答 寓制I 薛飞群 研究员 上海兽医研究所 兽药学 5 辩 谢纯 费陈忠 研究员 上海兽医研究所 兽药学 l 委 ／ 口 贝 会议记录(秘书) 顾惠明 论文答辩时间地点 2015年5月25日，上海兽医研究所 万方数据 摘要磺胺氯吡嗪钠(sulfachlorpyrazine 摘要 磺胺氯吡嗪钠(sulfachlorpyrazine sodium，SPZ)是磺胺类药物的一种，在兽医临床上用来 治疗家禽球虫病。若大剂量使用或不遵守休药期规定，药物易在动物体内蓄积，威胁人类健 康。免疫学检测方法作为兽药残留大规模检测的主要方法，具有特异性强，灵敏度高等特点。 目前国内外关于SPZ残留的酶联免疫检测方法(ELISA)的报道较少，未见关于SPZ的化学发 光免疫分析(CLIA)检测方法的报道。本文制各了SPZ的单克隆抗体，在此基础上建立CLIA 方法；同时对磺胺药物多残留快速检测技术进行探索，合成了药物的母核抗原．磺胺噻唑(TS) 并制备其多克隆抗体，分别用ELISA方法和CLIA方法对抗体进行鉴定。 1、SPZ单克隆抗体的制备及鉴定。本实验通过重氮化方法制备了完全抗原SPZ．OVA，免疫 小鼠4次后，选取血清抗体效价较好的小鼠脾细胞进行细胞融合。经过筛选并将阳性克隆按有 限稀释法亚克隆3次，得到稳定分泌抗体的细胞株。将细胞株扩大培养后，腹腔注射小鼠制备 腹水。将腹水单克隆抗体D9纯化后通过间接ELISA确定包被原最佳浓度为0．011ag／mL，单抗的 工作浓度为l：4×105，在最佳抗原抗体工作浓度下进行ci-ELISA实验，建立标准曲线，得到 曲线线性方程为)，=．0．3369x+1．347，R2一o．994，计算得抗体半数抑制浓度(IC50)为326ng／mL；