活性氧对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究-临床医学；外科学；胸心外专业论文.docxVIP

大津医科人‘j乏颂十学何论文中文摘 大津医科人‘j乏颂十学何论文 中文摘要中又捅斐 目的：建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型及体外大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模 型，利用Annexin V-FITC／PI双染法、免疫组化法、FCM法、MTT法及Western blot法分别检测细胞凋亡、细胞增殖活性、及信号转导子和转录激活子3(STAT3) 磷酸化水平，观察活性氧簇(ROS)在缺血再灌注损伤心肌保护机制中的作用， 并探讨ROS对心肌细胞中酪氨酸激酶2．信号传导与转录激活因子 3(JAK2一STAT3)通路的影响。 方法：1、将32只实验大鼠(体质量240--一2809)随机分为4组，每组8只大鼠： (1)空白对照组(Sham组)：开胸后将6／0无损伤缝线穿过左冠状动脉前降支，并 不阻断血管。(2)缺血再灌注损伤组(I／R组)：使用6／0无损伤缝线阻断左冠状动 脉30min后，开放血管。(3)缺血后处理组(PostC组)：缺血30min后，立即进 行缺血后处理(开放10s随后再阻断10s，反复3次)。(4)缺血后处理+MPG组 (PostC+MPG组)：再灌注前5min静脉注射自由基清除剂MPG(20mg／kg)。其余 处理同缺血后处理组。腹腔注射10％水合氯醛(3 mg／g)，大鼠四肢接心电图监 护电极。分离右侧颈总动脉安置动脉测压管；分离并切开气管，连接小动物呼 吸机，气源为室内空气，呼吸频率60次／min，潮气量13～15ml。左侧第4肋间 开胸，使用6／0无损伤缝线，穿过左冠状动脉前降支并阻断血管。心电监护显示 ST段显著抬高表明冠脉阻断成功。阻断30min后，松开缝线使血管再通，心电 监护显示ST段回落。随机选取8只实验大鼠于再灌注10min取心肌标本，用于 检测JAK2一STAT3通路活性；随机选取8只实验大鼠于再灌注2h取心肌标本， 使用心肌细胞凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡、免疫组织化学法检测心肌组织中 bcl-2及bcl一xL蛋白水平、Western blot法检测磷酸化STAT3(p．STAT3)及总 STAT3(t—STAT3)水平。2、大鼠，tl,肌细胞(H9C2)经体外培养扩增，使用对数生 长期细胞做实验处理。预实验部分分别使用浓度为0、5、10、20、50、100 gmol／L H202处理H9C2细胞，以确定最佳H202预处理浓度。观察低浓度H202预处理对 缺氧／复氧所引起细胞损伤的影响。确定最佳预处理浓度后实验部分将细胞分为 四组(1)对照组：常规培养。(2)缺氧／复氧组：预先在5％C02，95％N2培养箱 大津医科人!、；t硕十学何论文中培养120 大津医科人!、；t硕十学何论文 中培养120 min，复氧30 min。(3)H202预处理组：预先给予确定浓度的H202 处理90 min换液，24 h后重复缺氧／复氧处理。(4)JAK2．STAT3阻断剂(AG490) +H202组：在H202预处理自订10 min给予10．Ltm01／LAG490处理，余处理同H202 预处理组。处理完成后分别使用AnnexinV-FITC／PI双染法及FCM法检测细胞凋 亡；MTT法检测H9C2细胞增殖活性；Western blot法检测信号转导子和转录激 活子3(STAT3)磷酸化水平。 结果：1、缺血后处理抗凋亡作用：假手术组心肌组织中可见微量bcl-2及bcl-xL 蛋白表达，未见明显心肌细胞凋亡；缺血再灌注损伤组bcl一2及bcl—xL蛋白水 平均明显升高，可见大量心肌细胞凋亡。缺血后处理显著上调bcl-2(42．4±5．6 比8．6+2．4，P0．05)及bcl—xL(19．94-3．2比9．64-2．5，P0．05)蛋白水平，并抑制 再灌注后一tl,肌细胞凋I二(37。84-4．0，比56．94-6．0，P0．05)。 2、MPG(自由基清除剂)对缺血后处理抗凋亡作用影响：缺血后处理前 使用自由基清除剂MPG可使再灌注后心肌组织bcl-2(10．54-2．1比42．4±5．6， P0．05)及bcl—xL(9．9±2．3比19．9士3．2，P0．05)蛋白水平显著降低，并显著升 高再灌注后心肌细胞凋亡比率(55．7+7．7比37．8+4．0，P0．05)。 3、MPG对JAK2一STAT3通路影响：缺血后处理显著上调再灌注后STAT3 磷酸化水平(O．274-0．02比0．434-0．08，P0．05)。再灌注前使用MPG显著降低缺血 后处理后P—STAT3水平(0．274-0．04比0．434-0．08，P0．05)，抑制JAK2一STAT3 通路活性。 4、不同浓度H202预处理对H9C2细胞的影响：与其他各浓度组相比，20 I_tmol／L组的STAT3磷酸化水平显著升高；201am