环氧合酶及其抑制剂对人晶状体上皮细胞影响的实验研究-眼科学专业论文.docxVIP

环氧合酶及其抑制莽j对入晶状体上皮 环氧合酶及其抑制莽j对入晶状体上皮 细胞影响的实验研究 中文摘要 藜 言 后发性国内障(posterior capsule opaci6cation，PC0)是导致患者术后视 力下降鲍最主要并发癜。尽管手术或激光廷囊切开是一静较为有效懿治疗 方法，僵存在一定的酸陷。函诧探索一种新的途径防治自内障翻霜发性自 内障的发生具有重要的实用价值。 已经证实后发性自内障的发生与术后残黧的晶状体上皮缀胞(1e魏s ep— i蠡蠢i采e礤s，娅e)遘度瀵殖、迁移、分纯，黻及术盖翎臻稻炎症反应蠢关。 细胞生长增殖与多种躐素有关，其中生长因子(gm叭h fac￡or，GF)程此过 程中起着熏要作用，是促进晶状体上皮细胞增殖、分化、移行引起后发性白 内障的主要嚣素，羲b褥F的终震尤必突窭。 分裂原激活的蛋自激酶家族(mitogen—activated protein kinase，MAPK) 的信号转导通路是保守的信号转姆系统。通过三级酶促级联反应(MAP— KKK．MAPKK。MAPK)激活，调节特定的基露表达；其中纲臆外信号谰节激 酶(Em￡)被称为分裂原激滔的掰ApK，主要介辱捉进细臆增殖程分化静信 号转导；p38MAPK通路为应激激活的MAPK通路，能被炎症、应激、损伤等 信号激活，邋过转录因子诱导保护性蛋自质的生成，增强细胞对应激原的抵 撬力；并髓介导缨胞臻亡酶信号转导。 环氧合酶(cyclooxygenase cox)是催化花生四烯酸转化成前万lj腺索和 其它二十烷酸类物质的关键酶。它有两种同工舁构体，即COx-l和cOx一 2。eOx—l为缝痰燮基毽，分导具套燕嚣生理凌麓(妇：盘蛰收缩、盘小叛凝 集、免疫反应、胃肠粘簌保护等)的pGs合成，以维持机体囱身功能的稳定。 COx_2为诱导型基因，柱生理状态下，正常组织细胞不表：达或低水平液达。 警细照受到剑伤、炎癍等裁激时霹裔表达，缨魏因子翻生长因子可以强烈懿 诱导其表达。已经发现COx-2蓑阂在一些炎症和增殖性疾病中遗褒达。 以COx也作为靶点，通过cox．2抑制剂抑制细胞增殖，是目前该领域研究 以COx也作为靶点，通过cox．2抑制剂抑制细胞增殖，是目前该领域研究 的热点。 阿司匹林是环氧合酶非选择性抑制剂。作为葚#甾体类抗炎药物(non． steroidal anti—i11fl籼atory dmg，NSAID)的代表，广泛用于抗炎、止痛和抗血 栓形成。另外，由于阿司匹林可拮抗C0x的活性，对产生较多COX的肿瘤 组织、平滑肌细胞、血管内皮细胞等具有抑制作用，对促进损伤组织的修复、 减轻炎症反应和维持正常的血液动力学状态具有积极的作用。随着人们对 环氧合酶认识的提高，COx-2在抗炎或促炎方面具体作用的研究的进展，激 发了人们对NSAID作用机制的深入了解，阿司匹林的作用再次得到重视。 由于阿司匹林价格低廉、药源充分，深入研究其作用机理，扩大阿司匹林的 临床应用范围，减少药物的副作用，无疑将有重大的ll缶床意义。 鉴于此，我们作出这样一个推测：白内障手术引起的创伤和炎症反应， 刺激bFGF的生成，通过MAPK途径启动了细胞内的信号转导通路，诱导晶 状体上皮细胞中C0x-2的表达，进而使PGE：合成增加，再通过其可能的对 DNA合成的调控作用，导致晶状体上皮细胞增生，引起后发性白内障的形 成。因此，应用COX的抑制剂和MAPKs信号通路特异性的阻断剂，将会抑 制由此引发的晶状体上皮细胞的增生，诱导细胞凋亡，达到防治后发性白内 障的目的。 为证实所作的推测，本实验从bFGF对培养的人晶状体上皮细胞增殖 的作用机制，以及诱导的cox．2基因表达着手。通过研究bFGF作用后，引 起的晶状体上皮细胞增殖、COx_2的表达、阿司匹林对COx-2表达的抑制 和促进晶状体上皮细胞的凋亡作用，以及MAP弛信号通路在这些过程中所 发挥的作用。来探讨COx-2及其抑制剂阿司匹林在后发性白内障形成中 的可能的作用机制，为后发性白内障的防治提供实验依据。 方 法 本研究分为三部分 第一部分细胞传代培养及bⅣ珂诱导的COX-2表达的检测 冻存的细胞复苏培养，取第三代细胞用于实验。用sP免疫组化法检测 bFGF刺激6小时后COX．2蛋白的表达，并与对照组相比较，以胞浆内出现 棕黄色颗粒为阳性表达；采用RT-PCR和Western blot方法检测bFGF刺激 ·2· 下，不同时闻点(1h、3h、6h、12ll、24h)cox乏的mRNA翻攫白的表达。 下，不同时闻点(1h、3h、6h、12ll、24h)cox乏的mRNA翻攫白的表达。 第二部分 簿司臣穗对入最状体上皮缀臆增殪影确盼检涌 取经阿司匹林处理24h后的人晶状体上皮细胞，进行M7rr比色和 [3H]一TdR掺人