活性氧影响肿瘤细胞对促凋亡信号敏感性的机制研究-人体解剖与组织胚胎学专业论文.docxVIP

中文摘要活性氧影响肿瘤细胞对促凋亡信号敏感性的机制研究 中文摘要 活性氧影响肿瘤细胞对促凋亡信号敏感性的机制研究 摘要 、辽自从三氧化二砷(As：0，)成功应用于急性早幼粒细胞白血病(APL)的治 疗以来，肿瘤的诱导凋亡疗法引起了人们的关注，目前认为，多数化疗药物均 可作为促凋亡信号触发肿瘤细胞的凋亡。但是，研究中发现不同肿瘤细胞对促 凋亡信号的敏感性有很大的不同，因而大大限制了诱导凋亡的策略应用于临床 肿瘤治疗。 活性氧(reactive oxygen species，ROS)是真核细胞在有氧呼吸时，呼吸链电 子传递过程中，～小部分氧不能被完全还原的产物总称，包括超氧阴离子(O：．) 及其代谢产物过氧化氢(H20：)等。目前研究表明，多数促凋亡信号可以刺激 细胞ROS水平的增高，而细胞固有ROS水平可能与肿瘤细胞对促凋亡信号的 、／ 敏感性相关。j 本研究分为4部分： 第一部分：固有ROS水平与肿瘤细胞对促凋亡信号敏感性的关系 目的：研究细胞固有ROS水平与肿瘤细胞对促凋亡信号敏感性的关系 方法：利用流式细胞仪、电子显微镜等手段检测肿瘤细胞的固有ROS水平 及其对As，0，促凋亡作用的敏感性并考察二者之间的相关性，干预细胞ROS水 平观察细胞对As，O，促凋亡敏感性的变化。 ， ～、J结果：肿瘤细胞对As：0，促凋亡敏感性与细胞ROS水平相关，以各种手段 、 ／ 抬高细胞的ROS水平后，细胞对As：O。促凋亡作用的敏感性明显增强。歹 ／ 结论：固有ROS水平是影响肿瘤细胞对As，0，的促凋亡作用敏感性的重要 因素之．一。 第二部分：ROS在As：o，诱导NB4细胞凋亡中的作用 目的：探询在As：O，诱导NB4细胞凋亡中，调控ROS水平的环节及ROS引 发的下游事件。 方法：利用流式细胞仪、clark氧电极等手段及撤药实验、PT孔干预等方法 中文摘要检测As：0，作用下凋亡的可逆性及呼吸链活性、线粒体跨膜电势(A 中文摘要 检测As：0，作用下凋亡的可逆性及呼吸链活性、线粒体跨膜电势(A vm)、细 胞ROS水平等参数的变化，并考察它们之间的关系。 ／结果：As：O，作用3h后走向不可逆凋亡。As20，作用下，线粒体呼吸链活性 被抑制，ROS生成加速；△vm经历“升高一降低”变化，3h始开始降低，PT 孔稳定剂可逆转△vm的降低使之维持在一定水平；ROS水平持续升高，3h 气／ 时有跳跃性增高，PT孔稳定剂对ROS升高趋势无明显影响。j 结论：As，0，作用引起呼吸链的抑制，引发△vm的升高，由此造成ROS 生成加速及ROS水平的升高，当ROS水平突破一定阈值，引发了PT孔的不可 逆开放，△1lr m的消解乃至崩溃，并最终使细胞走向凋亡。因此，ROS是As，0， 诱导凋亡信号传导中的一个环节。 第三部分：As：0。诱导凋亡时ROS与转录因子NF—x B的关系 背累目的：近年研究表明ROS可激活MAPK增殖系统及转录因子核因子 、 K B(nuclear factor K B，NF—K B)，从而启动～系列促增殖基因的表达和抗凋亡 因子的激活，有利于细胞的生存。本部分拟考察As，O，诱导NB4细胞凋亡时ROS 水平变化与NF．K B的关系。 方法：利用凝胶电泳迁移率变迁分析(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)、NF—K B报告基因、免疫荧光激光共聚焦扫描、Western blot等手 段检测As：O，作用下NF—K B是否被激活；利用质粒转染以抑制NF—K B活性以 确认NF，KB的角色；通过抬高细胞的ROS水平，考察NF—KB活化和△vm 变化的情况。 ，／ 结果： As：0，作用下细胞内NF—K B．被激活，NF—K B的角色是拮抗凋亡， 7 抬高细胞的ROS水平后，NF—K B活化(生存)和A 1l，m的消解(死亡)程度 、厂 均增强。I J 结论：As：0，作用下NF—K B的活化和A 1l，m的消解在很大程度上都依赖于 细胞ROS水平，凋亡最后是否得以发生决定于NF—KB活化(生存)和A vm 的消解(死亡)的相对强度。 第四部分：白血病细胞中PML—RAR a与解偶联蛋白2、ROS水平的关系 中文摘要一1融目的：己知解偶联蛋白2(UCP2)可以降低细胞ROS生成的速率， 中文摘要 一1融目的：己知解偶联蛋白2(UCP2)可以降低细胞ROS生成的速率， ＼ 睐源于APL的NB4细胞具有特征性的PML—RAR a融合蛋白。本部分拟考察白 血病细胞PML—RARQ与解偶联蛋白2、ROS水平的关系。 方法：应用Westernblot、免疫组化等手段检测几株白血病NB4、K562、HL60、 U937中UCP2的分布，并考察UCP2水平与细胞固有ROS水平及凋亡敏感性 的