黄斑蓝子鱼急性浅水应激反应的特点与牛磺酸的抗应激作用分析-海洋生物学专业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 中文摘要 鱼类应激时，主要启动两种生理反应系统，即“交感－嗜铬组织”系统和“下丘脑－ 垂体－肾间组织轴(HPI 轴)”系统。前者通过交感神经作用于嗜铬组织，使其分泌肾上腺 素；后者通过下丘脑分泌促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)作用于脑垂体，使其分泌促肾 上腺皮质激素(ACTH)，进 而 刺 激 肾间组织释放皮质醇。肾上腺素和皮质醇使血糖浓度升高 ， 以满足机体在应激时的能量需要；同时，鱼体细胞通过产生热休克蛋白(HSP)来增强对自 身的保护作用。 黄斑蓝子鱼(Siganuscanaliculatus)是我国东南沿海重要的植食性海水养殖鱼类。该鱼受 到刺激后，应激反应较强烈，容易造成鱼体受伤甚至死亡，给养殖生产带来较大损失。为 了弄清黄斑蓝子鱼应激反应的特点，开发降低应激反应的方法，本研究选取急性浅水应激 作为实验应激处理方式，主要通过测定血清的肾上腺素、皮质醇、胆固醇和葡萄糖等生理 生化指标的浓度以及脑中 CRH 和 HSP70 的 mRNA 水平的变化情况，探讨该鱼急性应激反 应的特点；同时，通过鱼体浸泡试验评估牛磺酸的抗应激作用。得到的主要结果与结论如 下： (1) 对黄斑蓝子鱼给予 4 min 浅水应激后，其血清肾上腺素水平立即显著升高(P0.05)， 从应激前的 2.00±0.22 ng/ml 达到应激后的 15.12±1.04 ng/ml，之后逐渐恢复到应激前水平。 葡萄糖浓度在应激后 20 min 达到最大值 7.10±0.38 mmol/L，是应激前(2.15±0.02 mmol/L) 的约 3.5 倍(P0.05)。应激后 60 min 时，脑中 HSP70 mRNA 的表达量达到最大值，为应激 前的 11.54 倍(P0.05)。血清皮质醇、胆固醇浓度没有显著变化(P0.05)。结 果 说 明 ，“交感 －嗜铬组织”系统可能是黄斑蓝子鱼的急性应激途径之一，鱼体通过释放肾上腺素来提高 血糖浓度以满足应激时的能量需要，同时通过诱导细胞 HSP70 的表达来增强鱼体的保护作 用 。这提示，血清肾上腺素和葡萄糖浓度以及脑 HSP70 mRNA 水平可作为反映黄斑蓝子鱼 急性应激状况的指标。 采用 RT-PCR 和 RACE-PCR 的方法克隆得到黄斑蓝子鱼的 CRH 基因(GenBank 登 录号为 KF039716)， CRH 前体 cDNA 序列的全长为 1025bp，其中 5’端非编码区有 123bp， 3’端非编码区为 389bp；编码区为 513bp，共编码 170 个氨基酸。跟其他物种一样，黄斑 蓝子鱼 CRH 前体氨基酸序列也由一个推测的信号肽、一个功能未知保守区和 CRH 成熟肽 组成。信号肽为 N 端的前 24 个氨基酸，裂解位点位于第 24 和第 25 位氨基酸残基之间； I II II 成熟肽位于一个潜在的蛋白水解信号(精氨酸-精氨酸)和一个 C 末端酰胺化信号(甘氨酸-赖 氨酸)之间，其氨基酸序列与其他鱼类具有 78%-100%的相似性。应激后黄斑蓝子鱼血清皮 质醇浓度和脑中 CRH mRNA 水平没有显著变化(P0.05)，说明黄斑蓝子鱼急性浅水应激时 可能没有启动 HPI 轴。 (3) 使用 20 ppm 牛磺酸浸泡蓝子鱼 2 d，可显著降低其急性浅水应激后的血清肾上腺 素和葡萄糖水平以及脑 HSP70 mRNA 表达量，说明牛磺酸具有一定的抗应激作用。 本文首次研究黄斑蓝子鱼的急性应激反应特点及牛磺酸的抗应激作用，研究成果对于 丰富鱼类应激生理内容具有较重要的理论意义，同时对于指导养殖生产中减少应激带来的 经济损失也具有一定的现实意义。 关键词：黄斑蓝子鱼；应激反应特点；牛磺酸；抗应激作用 Ab Abstract PAGE PAGE III Abstract Two kinds of physiological systems may respond to acute stress in fish, one is the sympathetico-chromaffin system and the other is the hypothalamic pituitary-interrenal (HPI) axis. In the former system, adrenaline may be released into blood from chromaffin tissues under the action of sympathetic. In the latter system, corticotrophin-releasing hormone (CRH) may be released from hypothalamus, and CRH will