分子生物学基本技术课件.pptVIP

医学分子生物学实验 基本技术;Molecular Biology Timeline;目的和要求;实验室规则;实验操作及实验报告要求;二、实验报告要求 1．实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告。实验报告要求语言准确精炼、表述流畅。 2．实验报告严格按照如下格式和内容书写。 实验编号 实验名称 实验人、学号、实验组员、实验日期 实验目的 实验原理 实验材料 方法和步骤 实验结果 结果讨论和结论 实验思考题 3．在写实验报告时，实验目的和原理应按照该次实验内容和实验步骤写出，要明确具体、有针对性。实验材料包括实验所用的实验动物、细胞或组织、重要的实验试剂和仪器设备。实验结果中应包括全部实验过程中观察到的现象、实验结果和实验数据。实验数据中的图表要有图名和表名，图名位于图下方，表名位于表格上方。图表需大小合适、标??清楚。图表内容和所包含的信息必须在实验结果中使用流畅简洁语言表达出来。结果讨论和结论是对实验过程、实验方法步骤的关键环节、实验设计的认识体会、实验结果、实验异常现象、实验思考题的分析和对该次实验作出的总结和结论。 ;分子生物学实验进程;生物技术（biotechnology): 基因工程、细胞工程、发酵工程、蛋白质工程和酶工程，新生物技术的核心是基因工程技术。 新技术：基因操作技术、生物治疗技术、转基因动植物技术、人类和其他生命体基因组工程、基因治疗技术、蛋白质工程技术、生物信息技术、生物芯片技术等。 生物技术产业：基因药物、重组疫苗、生物芯片、生物反应器、基因工程抗体、基因治疗与细胞治疗、组织工程、 转基因农作物、兽用生物制品、生物技术饲料、胚胎移植工程、基因工程微生物农药、环保、 海洋生物技术，以及现代生物技术对发酵、制药、轻工食品等传统产业的改造等领域。 生物技术在世界各国已经或正在成为新的产业生长点。 ;基因工程技术;上游技术（upstream）——基因工程 重组子的构建 工程菌的构建及高效表达;基因工程上游技术基本过程;基因工程技术;克隆（clone）:是指通过无性繁殖过程所产生的与亲代完全相同的子代群体。 基因克隆（gene cloning）:指把一个生物体中的遗传信息（基因片段）通过无性繁殖转人另一个生物体内的过程。通过基因克隆可以得到一群完全相同的基因片段，由于基因就是DNA分子，所以也称其为DNA克隆。 基因克隆技术: 包括基因的获取、基因的重组、基因的克隆化和基因的表达等。 DNA嵌合体（DNA chimera）：内、外源DNA插入载体分子所形成的杂合分子（嵌合DNA）。 重组（ recombination）：构建DNA嵌合体分子（重组子）的过程。 基因重组（gene recombination）:是将不同基因片段连接起来构成一个新的DNA分子的过程。;分子克隆（molecular cloning）：重组体分子的无性 繁殖过程。 基因工程（genetic engineering）、又称为DNA重组技 术（recombinant DNA technique）或分子克隆（molecular cloning）:特定基因（被称为目的基因或外源DNA片段）的制备、分离、鉴定、改造及其在不同生物间的转移等多项技术。 基因操作（gene manipulating）:指所有涉及到DNA或者RNA操作的技术，或者指所有基因工程和基因工程相关技术。 ;分子生物学实验基本技术;一 、核酸纯化技术;原 理;方 法; 核酸相 Protein变性相 有机相; 4. 苯酚的处理：重蒸-饱和-pH 重蒸：去除醌类氧化物 饱和： 防止核酸损耗 pH： pH7.0-8.0-核酸最适合 方法：蒸馏（183℃）0.1% 8-羟基喹啉-收集 （棕色瓶）-饱和与调pH≥7.8（Tris- HCl pH8.0）-0.2%β-ME, 4 ℃或-20 ℃保存 8-羟基喹啉的作用：减少酚氧化、提供颜色（黄色）指 示、抑制RNA酶活力、螯合金属离子抑制DNA 酶活性、提取RNA时与VRC作用使酚由黄变黑。;二、 离心技术;原 理;操 作;三、 凝胶电泳技术; 概 论;原 理;凝胶电泳 　　 以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分离蛋