分子生物学常用技术下课件.ppt

分子生物学常用技术;最了解的： PCR，电泳，ELISA，DNA提取，质粒酶切，NB，SB，转化，薄层层析，接种，培养，PAGE，细胞培养，磷酸钙转染，脂质体转染，表达蛋白，RNA提取，CHIP，配溶液，感受态制备，重组子过程的试剂盒，微生物的筛选及鉴定，质粒提取，HPLC，定量PCR;最不了解的： 分子杂交，DNA重组质粒的连接，转化和筛选，DNA分子探针，分子克隆，引物设计，RT-PCR，色谱，质谱，WB，PCR，Blast，检索，ELISA，NB，蛋白质分析，探针标记，分子量测定，WB，RNA提取，定点突变，蛋白质纯化;最想了解的： DNA重组，ELISA，WB，探针标记，凝胶图谱分析，分子杂交，RNA提取，NB，SB，噬菌体展示，GTP？构建载体，PCR，DNA克隆及应用，Blast，引物设计，分子克隆，RT-PCR，原代细胞培养，电泳，荧光免疫，酵母双杂交，分子标记检测方法，各种仪器的原理和使用，同一领域新旧技术对比，高效液相色谱;PCR产物; ;半不连续复制：;3’;;5′···T C T G C G C A G A A T ···3′; 原理: 模板变性、引物退火、DNA 聚合酶进行DNA链延伸;5’ 保护碱基+ 酶切位点+ 起始密码 +目的基因5’末端序列 3’ ; 5’ cg gga tcc atg aat ttt caa cag agg ctg 3’ BamHI; 原理: 模板变性、引物退火、DNA 聚合酶进行DNA链延伸;586 ctt ctg acc tgg atg cag aaa ttc tac aag ctc tga 621 196 L L T W M Q K F Y K L * ;5’ ccg ctc gag tca gag ctt gta gaa ttt ctg 3’ Xho I;;1. PCR：Pfu, 加A尾；[0922/8:00/a 张秀娟] 2. Agarose电泳：Gelred染色; [0922/b王楠 ] 3. 核酸纯化：凝胶回收Kit; [0922/18:30/c穆新燕] 4. Agarose电泳：检测回收条带; [0922/b] 4. 连接反应：pGMT, 4℃过夜; [0922/d刘静轶] 5. 转化：Top10, 热激法，蓝白筛选。[0923/8:00/e宋何煜 ];1. 挑克隆：2ml 含抗生素的LB + 1个克隆；[0928/8:00/f田士军] 2. 提质粒：Kit；[0929/8:00/g徐菲一] 3. 重组质粒的鉴定：双酶切反应，37 ℃2h；[0929/h李纯] 4. Agarose电泳：Goldview染色；[0930/8:00/b] 5. 测序和序列比对：生物技术服务公司； [0930/h] 6. 菌种保存：20~30%甘油-LB，-20/-70 ℃。 [0930/h];NCBI/Blast/Nucleotide blast;3. 外源基因转移技术和表达体系 4. 检测方法：电泳技术：agarose、SDS 分子杂交: SB、NB、WB、基因芯片技术 DNA序列测定 生物信息学分析技术 5. 基因功能研究的方法 6. 组学研究技术：基因组学、蛋白质组学;三、外源基因转移技术和表达体系;生物学方法：农杆菌介导的基因转导 花粉管通道法介导的基因转染 体外包装转染法 共转染 生殖细胞浸泡法介导的基因转染;生物化学方法：脂质体法：Kit 生物物理方法：胚胎干细胞法 电转染法：电转仪 物理学方法：基因枪法 显微注射介导基因转染 胚囊、子房注射法介导基因转染 激光微束介导基因转染 超声波介导基因转染 碳化硅纤维介导法;2.原核细胞表达体系：大肠杆菌;组成;重组蛋白的制备：细菌;实验三：重组蛋白在细菌中的诱导表达;实验四：Western-blot;3.真核细胞表达体系;(2) 昆虫细胞杆状病毒表达体系 杆状病毒主要感染昆虫，利用昆虫细胞生产重组蛋白。 受体细胞：草地夜蛾细胞株sf9和sf21。;(3) 哺乳动物细胞表达体系