分离自蜂蜜中的渗酵母的实时荧光PCR法快速鉴定.docVIP

分离自蜂蜜中的嗜渗酵母的实时荧光PCR法快速鉴定 陈世琼1 蔡雪凤1 逄波2 韩玥3 伊鋆1 任岩1 （1 北京市海淀区产品质量监督检验所 北京 100094；2 中国疾病预防控制中心 北京 102206； 3 北京市出入将检验检疫局 北京 100026） 摘 要：嗜渗酵母是导致蜂蜜腐败的主要微生物。鲁氏接合酵母是嗜渗酵母中最常见的种类。酵母的传统生化鉴定方法繁琐、耗时。为快速鉴定分离自蜂蜜的嗜渗酵母的种类，本研究建立了针对鲁氏接合酵母的实时荧光PCR快速鉴定方法。并用此方法对分离自蜂蜜的62株嗜渗酵母进行了快速鉴定，发现其中21株为鲁氏接合酵母。实时荧光PCR方法鉴定鲁氏接合酵母，全过程仅需约5小时，与常用的生化鉴定方法相比，简化了鉴定步骤，提高了鉴定准确性，缩短了鉴定时间。 关键词：蜂蜜 嗜渗酵母 实时荧光PCR 鉴定 Rapid identification of eosinophils yeast isolated from honey by real-time PCR method Shiqiong Chen 1* Xuefeng Cai 1* Bo Pang2 Yue Han3 Jun Yi 1 (1 Beijing Haidian District Products Quality Supervision and Inspection Institute, Beijing, 100094; 2 Chinese Center for Disease Control and prevention, Beijing, 102206; 3 Beijing Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Beijing, 100026 ) Abstract: Osmophilic yeast is the main microorganism which lead honey to corruption. Zygosaccharomyces rouxii (Z. rouxii ) was the most common type of osmophilic yeast. This study established a real-time PCR for rapid identification of Z. rouxii. Sixty two strains of osmophilic yeast isolated from honey were rapidly identified by this real time PCR method. The results showed that 21 of them were Z. rouxii. To identifiy Z. rouxii by real-time PCR method, the whole process only needs about 5 hours. Compared with the commonly used biochemical identification methods, the real time PCR method is more simple, accurate and time saving. Key words: honey; Osmophilic yeast; Real Time PCR; identification 【中图分类号】TS255.1 【文献识别码】A 【文章编号】 蜂蜜较其他食品而言，具有高糖、高渗透压等性质，因此具有一定的抑制微生物生长的作用，所以蜂蜜中所具有的微生物种类与数量是相对较少的[1,2]。但是，酵母、霉菌，以及一些能够形成芽孢的细菌，能够在高糖、低水分活度的环境中生存，它们也经常给蜂蜜产业带来问题[3,4]。酵母能够影响蜂蜜产品的货架期和质量的稳定性[5]。蜂蜜中出现的酵母主要有两类：一类为嗜渗酵母（osmophilic yeast），另一类为耐高糖酵母（sugar- tolerant yeasts)，其中嗜渗酵母对蜂蜜品质影响较大[4,6,7]。嗜渗酵母中，已有的研究报道表明，有结合酵母（Zygosacchuromyces）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、针孢酵母（Nematospora）和圆酵母（Torula）被从蜂蜜或其它高糖食品中分离出来[4,8-10]。鲁氏接合酵母是常见的嗜渗酵母，能引起蜂蜜及其加工产品变质。因此，2011，中华人民共和国卫生部发布并实施了《食品安全国家标准—蜂蜜》（GB14963- 2011），代替了《蜂蜜卫生标准》（GB14