抗肿瘤抗生素阿嗪霉素B和氯丝菌素的生物合成研究-生物学 植物学专业毕业论文.docxVIP

兰州大学研究生学位论文在ChlBl的947的H突变成F的DH突变体，检测到6．甲基水杨酸，1540位的Y突变 兰州大学研究生学位论文 在ChlBl的947的H突变成F的DH突变体，检测到6．甲基水杨酸，1540位的Y突变 成F后的KR突变体产生了苔色酸(OSA)，说明在I型重复使用聚酮合成酶的催化过 程中DH的功能是重要的但不是必须的，KR的功能的缺失并不影响其进一步的延伸反 应。 通过对Azinomycin B生物合成基因簇中p450羟化酶AziBl，氧甲基转移酶AziB2， 非核糖体聚肽合成酶(NRPS)AziAl的体外测活研究，证明了AziBl催化的是I型重 复使用聚酮合成酶的产物5．甲基萘甲酸C．3位置的羟化，AziB2催化的是接下来氧甲基 化，最后有AziAl识别3．甲氧基．5．甲基萘甲酸并以之为起始单元，起始Azinomycin B 的生物合成，证明了I型重复使用聚酮合成酶AziB产物的后修饰是发生在游离小分水 平上的，而不是发生在酰基载体蛋白(ACP)连接的蛋白水平上的。 氯丝菌素具有较好的抗菌和抗肿瘤活性，在前期的研究中发现的其I型重复使用聚 酮合成酶ChlBl产物6．甲基水杨酸的后修饰是发生在ACP连接小分子的蛋白水平上 的，在这个过程中，两个酰基转运蛋白(AT)ChlB3，ChlB6的底物容忍性相对宽泛， 而且在对ChlBl这一I型重复使用聚酮合成酶的机制研究的过程中，通过点突变KR结 构域的方法成功的把C11lBl这一六甲基水杨酸合成酶(6．MSAS)改造成了苔色酸合成 酶(OSAS)，在这些基础上，把ChlBl遗传改造来的OSAS，导入到Chloro嘶cm产生 菌antibioticus DSM40725的chlBl中断的突变菌株中，得到的新的重组菌株产生了 新的Chlorothricin类似物7和8，7和8显示出更高的抗菌活性。从而完成了从生物合 成机制的基础研究到组合生物合成利用的一个经典过程。 关键词：AzinomycinB，Chlorothdcin， I型重复聚酮合成酶，非核糖体聚肽合成酶， 后修饰基因，p450，甲基转移酶，组合生物合成 兰州大学研究生学位论文 兰州大学研究生学位论文 Abstract Azinomycin B，also named Carzinophilin A，first isolated from Streptomyces sahachiroi by Japanese scientists in 1954，has potent antitumor activity／n vivo and cytotoxicity．Then scientists isolated other Azinomycin B analogues-Azinomyeins form the fermentation culture of Streptomyces griseofuscua． Azinomycins feature set of unusual，densely assembled functionalities：a 3-methoxy-5-methyl naphthoic acid(NPA)moiety,a 2-amino-1，3-dicarbonyl group，an epoxide domain，and unprecedented aziridino 【l，2a】pyrrolidine(1-azabicyclo【3．1．o】hexane)ring system which has been the uniqueness structure in nature product．Azinomyein B has the best bioaetivity among the Azinomycins．Its effect伽vivo is comparable tO that of the clinically used DNA ISC drug mitomycin C．Azinomydn B binds within the major groove of DNA，and forms covalent interstrand erosslinks(ISCs)谢th apparent sequence selectivity by electrophilic attacks ofCl0 and C21 onto N7 positions ofpurine bases．Because ofthe poor availability and extreme instability of Azinomyein B，extensive synthetic efforts have been carr