抗艾滋病毒辣中草药的快速筛选-生物学、细胞生物学专业毕业论文.docxVIP

摘要目的：艾滋病(获得性免疫缺陷综合征)是由人类免疫缺陷病毒(HIv)所引起的[1】o HIV以人体免疫系统的中枢细胞一T4淋巴细胞为攻击目标，使患者的免疫系统失衡，免 疫功能低下，进而使人体成为各种疾病的载体，极易感染各种并发症或肿瘤最终死亡。 艾滋病在世界范围内的疯狂流行及高死亡率，严重威胁着人类的健康及社会的发展。目 前常用的治疗艾滋病的药物主要是蛋白酶抑制剂类药物和逆转录酶抑制剂类药物。这些药物成本高、副作用大、易引起各种并发症，并且无法兼顾对抗艾滋病毒及患者的免疫 系统12J。同时由于HIV．1在遭受药物攻击以后，其DNA在复制的过程中会发生基因突 变，使得HIV．1病毒产生相应的抗体，从而使病人产生耐药性。由于艾滋病人死亡的主 要原因是患者的免疫系统被破坏，患者遭受各种机遇性感染而死亡，而中医是从整体观 点进行辨证施治对症下药，以提高机体的免疫力为目的。而且中药副作用小，不会引起各种并发症，同时来源广泛，价格低廉，因而避免了西医治疗价格昂贵、毒性大、耐药性等缺点，其开发前景可观。随着治疗艾滋病的新靶点_P-TEFb的发现，一旦我们得到了可以竞争性结合CyclinTl，有效阻止CyclinTl与Tat结合的药物，抑制P．TEFb 的活性，进而阻断艾滋病毒基因组的复制，便可以保证该种药物对HIV一1的攻击长期有 效，也就可以克服抗艾药物耐药性的问题【3J。鉴于此，本论文构建出真核生物表达载体，利用酿酒酵母这一模式生物，运用酵母双杂交技术，依赖治疗艾滋病的新靶点一一TEFb，快速筛出可阻止CyclinTl与Tat互作，从而抑制p-TEFb的活性的中草药，为其进入临床治疗使用打下坚实的基础。方法：通过将目的基因CyclinTl和Tat分别连接入载体质粒pGBKT7和pGADT7-ReC 上，构建出真核表达载体pGBKT7．CyclinTl和pGADT7．ReC—Tat；将真核表达载体分别 转入酿酒酵母中，运用酵母双杂交技术，对中草药进行筛选；依据抗艾新靶点P-TEFb 的特性，筛选出能够抑制Cycliml和Tat互作，从而抑制P-TEFb的活性，阻断艾滋病 毒基因组复制的有效中草药，达到快速筛选抗艾药物的目的。结果：1、本研究通过PCR扩增出正确的目的基因片段Cyclintl和Tat，运用分子 生物学方法成功构建出真核生物表达载体pGBKT7-CyclinTl和pGADTT-ReC—Tat；2、成功将真核生物表达载体pGBKT7．CyclinTl和pGADT7·ReC—Tat转入酿酒酵母AHl09菌株中，经验证，二者确实相互作用，成功构建出酵母双杂交系统；3、运用酵母双杂交技术，分别对供试的20种中草药进行筛选，成功筛选出了抑 制Cyclintl和Tat相互作用的中草药：商陆、黄芩、黄柏、紫河车(特定浓度下)。关键词：酿酒酵母，酵母双杂交，艾滋病，中草药快速筛选IIABSTRACTAIM：AIDS or”Acquired Immunodefiency Syndrome”is caused by the human immunodeficiency virus(HIV)，which takes the central eell of the body’S immune system—T4 lymphocytes aS targets，weakens and then destroys the body’S immune system，thereby enables the body to become the carrier of various diseases，easily contracting all kinds of complications or tumor and to death．AIDS with hi【gh mortality ratespreading all over the world is a major threat to develoPment and to human society．Nowadays，thecommonly used drugs in the treatment of AIDS is the protease inhibitor and the reverse transcriptase inhibitor．These drugs have some defects such as high costs，side effects，easy to cause a variety of complications，and can not take into account of both the fighting against HIV and the patient’S i