抗水稻黄单胞菌深海独岛枝芽胞杆菌A493及其活性物质分析-微生物学专业毕业论文.docxVIP

抗水稻黄单胞菌深海独岛枝芽胞杆菌A493及其活性物质研究捅要 抗水稻黄单胞菌深海独岛枝芽胞杆菌A493及其活性物质研究 捅要 人们已经对陆地微生物活性次级代谢产物进行了广泛的研究，而对海洋微生物 相关方面的研究还比较欠缺。相对于陆地微生物，海洋微生物生活在非常特殊的环 境中，其代谢产物的多样性和代谢途径的独特性决定了海洋微生物次级代谢产物具 有新颖的结构和特异的生物活性。本研究从海洋微生物中筛选具有抗植物病原菌作 用的菌株，并对其中一株深海独岛枝芽胞杆菌(Firgibacillus dokdonensis)进行抗菌 化合物分离鉴定研究工作。 以水稻黄单胞菌等为指示菌，采用平板对峙法对411株海洋细菌进行了抗菌筛 选，初筛获得具有抗菌活性的海洋菌株81株，复筛获得具有稳定抗菌活性的菌株7 株，最后通过测定抗菌谱，得到一株抗菌谱特异并且稳定拮抗水稻黄单胞菌的深海 独岛枝芽胞杆菌(彤dokdonensis A493)。 A493产抗菌活性物质可以耐受1000C的高温，在pH 4．10和紫外照射环境中活 性稳定，可以通过3 kDa的超滤管，并且对蛋白酶不敏感。该物质具有很强的极性， 只能溶解在水和甲醇中。酸沉淀和硫酸铵沉淀实验结果排除了活性物质是脂肽类物 质的可能性。 通过离子交换色谱法提取，再经两次薄层层析硅胶板回收分离，得到了精制样 品。经过LC．MS分析，初步判断活性物质分子量为317 Da；经Doskochilova溶剂 系统纸层析验证，该物质与链霉素的纸层析图谱极为相近；其紫外吸收为末端吸收， 茚三酮显色法显示黄色。一般氨基糖苷类物质分子量是大于400 Da的，结合该物质 抗菌谱的特异性和产生菌分离环境的特殊性，表明该活性物质极有可能是一种新型 的氨基糖苷类抗生素，初步命名为ZH．1 1。 对A493产活性物质ZH一11发酵条件进行了初步优化，使其单位体积发酵液抑 菌效果提高18％。活性物质ZH一11相对效价测定的实验表明，A493发酵无菌上清 液对水稻黄单胞菌的抑菌效果相当于15．6 I-tg／rnl的标准链霉素。 对水稻白叶枯病害的温室实验表明，经过A493无菌上清液处理，水稻生长20 d 后对水稻白叶枯病害防治效果达到了66．7％，且对水稻的正常生长无不良影响。 关键词：深海微生物；独岛枝芽胞杆菌；植物病原菌；水稻黄单胞菌；氨基糖苷类 抗生素；温室实验 华中农业大学2011届硕士研究生学位论文Abstract 华中农业大学2011届硕士研究生学位论文 Abstract Terrestrial microorganisms have been more extensively studied for the discovery of bioactive metabolites than marine microorganisms．Marine microbial metabolites exhibit a broad spectrum of biological activities because of living in quite different environments compared to terrestrial counterparts and may have unique metabolic pathways to produce metabolites with novel structures and activities．In this study,we screened marine microbes which were against plant pathogens．The antibacterial compound was purified and identified from deep sea矿dokdonensis A493． Xanthomonas oryzae pv．oryzae and other pathogens were used as indicating strains． In total，4 1 1 marine isolates were investigated by confront culture method in which about 8 1 strains showed potential antibacterial activities against plant pathogens．After re—screening based on stable antibacterial activity，7 marine strains were selecte