抗纤Ⅰ号复方中药抗实验性大鼠肝纤维化作用及其分子机制研究-病原生物学专业毕业论文.docxVIP

文摘典淤、消炎解毒、软坚散结的作用。本室以往的动物实验也证实抗纤1 号 是一个有前途的中药复方制剂。本研究在整体动物实验基础上，通过体外培养的HSC ，采用血清药 理学方法，结合膜片钳技术，从细胞和分子生物学水平研究抗纤 I号复 方中药抗肝纤维化的可能作用机制。飞、第…部分抗纤 I号复方中药血清对大鼠肝星状细胞增殖凋亡的作用目的z 研究抗纤 I号复方中药对大鼠 HSC 增殖和凋亡的影响，进一 步从细胞和分子水平探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:肝星状细胞株，由 CC14 诱发的肝硬化大鼠中分离并通过培养 使细胞白发获得永生性，其表型为油化的 HSCo 用抗纤 I号复方中药煎 剂给正常大鼠和由 CC14 诱发的肝纤维化大鼠灌胃，制备正常大鼠药物血 清和肝纤维化大鼠药物血清;用秋水仙碱给正常大鼠灌胃，制备正常大鼠秋水仙碱药物血消;用同样的方法以生理盐水制备的正常大鼠血清作 对照。各组药物血泊和对照血清干预 24h 厢， MT丁比色;去测定细胞增 殖，生化法测定起脯氨酸，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率:流式细 胞仪和双荧光法检测各组药物血泊和对照血清处理的 HSC 的细胞凋亡情 况。_..础结果:药物血清在所用浓度范围内，细胞形态无明显变化。MTT 实 验结果发现，各剂量药物血清均可抑制 HSC 增殖，在所用浓度范围内里 剂量依赖性抑制作用，但并不是浓度越大越好，20%浓度组与 40%浓度 组光显著性差异 (P0.05) 。郑脯氨酸测定显示，各组药物血清干预后，班、飞、. 脯氨酸比对照组 (0.218土0.044) 明显降低(P0.05) ，分别为秋水仙碱药物血.? 清 (Col) 组 (0.148士0.017) 、抗纤I 号正常大鼠药物胆消 (AN) 细(0.114士0.013) 、抗纤1 号肝纤大鼠药物血清 (AF)组(0.079土0.008) 。流式细? --胞仪测定结果发现，各药物血清干预组增殖指数PI 分别为 Col 组(54.78土4.45)、AN 组(46.81:1:3.67) 、AF 组(4 1.23:1:3.57) ，较对照组(59.58土4.79) 显著降低 (P0.05) ;凋亡率分别为 Col 组(11.69:1:1.46) 、AN 组(19.07土2.35) 、 AF 组 (20.32土2.64) ，较对照组(5.84:1:1.05) 显著增加(P0.05) 。双荧光法检测结果，与对照组比较，各药物血清干预组细胞2中文摘要凋亡数明显增加，以肝纤维化大鼠药物血清组增加最为明显。 结论：抗纤I号复方中药不仅可直接抑制HSC的增殖，并可促进HSC的凋亡，从而减少细胞外基质合成，起到抗肝纤维化的作用。第二部分抗纤I号复方中药血清对大鼠肝星状细胞TGF．p1及受体影响的研究目的：观察抗纤I号复方中药血清对肝星状细胞TGF．p1与受体基 因及蛋白表达的影响，寻找新的药物作用靶点，更为深入地研究抗纤I 号抗肝纤维化的作用及机制。方法：采用HSC体外培养技术。各组药物血清制备同前。实验分组 如下：HSC空白血清对照组：秋水仙碱(C01)药物血清组；抗纤I号正常 大鼠(AN)药物血清组；抗纤I号肝纤维化大鼠(AF)药物血清组。采用 RT．PCR法检测TGF—D 1和TpR—I的mRNA表达；采用Westem blot法和 流式细胞技术检测TGF．pl和TpR—I的蛋白表达。结果：RT—PCR结果显示：TGF—p1和TpR．I的mRNA表达分别为： AF组(O．363士O．027和O．417士O．025)、AN组(O．534士O．043和O．598士O．036)、 Col组(O．884士O．042和O．808士O．049)、对照组(1．35 1士O．087和1．236士 O．070)。各药物血清组均能使TGF—p1和TpR_I的mI矾A表达比对照组下 降(PO．05、)，而且AN组低于Col组，AF组低于AN组。以上各组之间 两两比较均有显著性差异(Po．05)。Westem blot法结果显示：各药物血 清组均能使TGF．p1的蛋白表达比对照组(1．ooO士O．05 1)下降(PO．05)，而 且AN组(O．50l土O．032)低于C01组(O．668士O．035)，AF组(O．334士O．018)低于 AN组。以上各组之间两两比较均有显著性差异(PO．05)。流式细胞技术检测结果显示：各药物血清组均能使TpR—I的蛋白表达比对照组 (1．ooO士O．049)下降，而且AN组(O．506士O．032)低于Col(0．648土O．047)组， AF组(O．358土O．031)低于AN组。以上各组之间两两比较均有显著性差异 (PO．05)。结论：各药物血清组均能下调TGF—pl和TpR．I的mRN