梅山猪LH-β基因克隆及其表达效应研究-遗传学专业毕业论文.docx

鲤删杰堂些主鲎堡垒生——梅出猪LI-I-垫基因克隆及其表达效应研究 鲤删杰堂些主鲎堡垒生—— 梅出猪LI-I-垫基因克隆及其表达效应研究 遗传学专业 博士研究生吕学姨攒罨教燃，4世贵栽拨 鉴于瑾一§是动物生殖裁发育调留孛十分关键馥性激素，趱内多}对 猿L卅§基鼠的硖究甚少，尚拳她到对篡在体内外转纂殴表达及其对确 耪免疫积垒菹系统翁深入研究，西藏，我秘裁梅由猪LH一器基霞静壳喙 及其原核、真核表达和体内转蘩因表达对小鼠嫩殖和免疫系统作用和机 理透行了鞍系统耱研究，蠹葫戳骞蘑新型褰效警整满节基嚣趔龆奠定坚 实基础。 酋先，我们率先克隧了优良高产地方猪种梅山猪LH-8基风。从梅． 出猪藕壤薅弹f舔蕤蔽睬矗嚣，弼鼹一怼R懿方法克隆获褥了簿由猪睡一叠· 基因，与其他地方来源于猪Ltt一13有98％同源，其开放阅读椴长度为 417bp，缠褥139令氮基酸残鏊，鸯子鬣舞14．7kD，等邂焘为7。80，疏 水氨基酸占55．4％，亲水氨基酸占31．7％，碱性氨基酸占7．9％，酸性氨 罄酸占；5。溅。鏊霞翳1-31位棱彗酸虢璐强个氨萋酸残基豹信号获， 31-448位核苷酸编码139个氨毓酸残赫的成熟片段。 第二，用DNA重组技术将己克隆的猪LH一8 cDNA片断插入pGEX一1 x 雩曩粒，褪建了猪U4一§蘩毽静臻棱表达矮较螨秣j{-§，转键大瓣梧骜， 以质粒PCR和BamlfI、EcoRI双酶切筛德鉴定转化子，获得了台420bp 插入灸隧纂霹蔗璐敷螫缀+f。娃fl，联；诱导融会缀癌表达，经RT-PCR稔 测发现42050的特异靛“卜B条带；通过SDS-I，^GE分析，在43KI)处m 珧锚1’～川卜转融合赞巍条举，其表达餐占甚缨涟蛋鑫餐敬孙懿，涎孵 墨兰堡!苎生整曼!二!燕璧箜查熊热垒兰苎壁壁查 ．一—— 猪Lt|一p繁因得到了雁确转泵和表达。提墩纯化回收融台蘑组蛋自，并 鑫譬缀蛋爨受痉家兔，瑟蚕了耱舅整摭蒋漓魔隽25800揍猿浯§戆毫 免兔瓶清。 第三，曾次将克隆判的猪LH-0基因距克隆到真核表达型载体 VRl020上，瀵遘囊辍蕊鬟蜂方法建转毯子孛簿选辍链亮囊；麓豫稿l、 Bgt II双酶切鉴定重组子。得到的羹组真该表达质粒转染Cos7细胞株， 鼹一簿{l梭戮猿臻一§+结祭黢示；邋涟囊疑赎建袭黢_酶凌努撩，褥辩猿 LH-辟基因以正确方向插入的重组粪核表达质粒VPLI_}一B。重组质粒 VPLH-§经糕矮体夯嚣转染Cos7缨魏，培莽不藤黠瓣瑟撬墩鞲R懿避蠢 RT-PCR，发臻转黎缁脆RNA中含有与LH-璺基因对应的mRNA；这些结果 表嘲汪成功槐建了既}l一§麴冀核表这蒺粒，熊歪酶转录表达城一§。 篇四，为了探讨VPLH-目体内转旗因袭达对小鼠嫩殖和匏疫岽统的 嚣蒂佟霉襄撬理，，筏錾{萋浚鼹簧辩璃子瓣袋傣蓬装VPL鞋-昏爱毅，与 PMSG和hCG以及麓组LH-爵蛋白分别肌肉淀射小鼠。系统地研究了它 襄对夺簸戆畿蓬襄凳痰爨鼹瓣影黎。实验蘩巢爱襞；簧窭验缀枣惑豁篱 血液的免疫细胞数懿均较对照组增多，在14天时蓑异显著(Po．05){ 盔溃lgG鑫爨豁较对爨枣爨骥显臻搬，葜孛媛登、瓢F缓较突塞。蕊赛 验组衄清中LH和FSH的永平均比对照组升高，实验组之间簸异不明屡 ￡羚§。艇。实验缝爨麓每鬻产睾}数茨袋逶拳蚜赛予对照缝，警缘多1．4 只。僚各实验缀问差异不显箸(PO．05)。这黧结果初步表明：本实验克 篷稳建楚猿VPLH一塞茨整、蘩缝L酚§篮鑫埝麓笈箨骥显夔燮建警爨溪 节弗掰。哥较好地促缓雌性动物的摊卵、怀孕和正常产仔{并且对动物 瓣兔嶷撬锈凳苓炎影l穗，遥袭理篷一定戆舞癀漤强毅霾。鬻蕊予鬻臻俸 分子包装VpbH一§质粒体融转染表达安全无毒耐作用。本实虢为迸 、涉 深入磺窕瑟爨赫犊生装生鑫谜繁垫爨艇裁、羚潞褒效安全、经涛篷缆懿 挺进动锈繁麓豹新途经受定。j’露好的纂础。 关建漏；猪，l崩一彗， 鏊瓣宠隧， 耩闪裘达。牛殖，免疫 ． ． 竖趔盔堂氅点翌垒望塞一一 Molecular cloning of porcine谍一参gene and its transgenetic expressing effect on the reproduction and immunity of mouse Major Genetics Doctorate student：Lv Xuebing Tutor Professor：Liu Shig珏i Now little iS known about the effect ofporcine LHi≥gene on the reproduction and immunity．And there still lack the systematic explorations Oil the transgeneti