抗肿瘤中草药猫人参的种质鉴别及其与近缘种的活性比较研究-植物学专业毕业论文.docx

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘茎 或其它教育 机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡 献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文使用授权书声明 本人完全了解逝姿盘鲎 有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权逝鎏盘鲎 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 摘要猫人参为华东地区治疗各类消化道肿瘤的习用中草药，是目前本地区抗肿瘤 摘要 猫人参为华东地区治疗各类消化道肿瘤的习用中草药，是目前本地区抗肿瘤 处方中最多用的品种之一。目前中药学及植物学专著多记载其原植物为对萼猕猴 桃(又称镊合猕猴桃)(Actinidia valvata Dunn)，但民间也有以大籽猕猴桃(以 macrosperma C．ELiang)为猫人参的原植物，甚至认为后者入药疗效更佳．而且 因猫人参用量较大而野生资源有限，时常有同属其它种类如黑蕊猕猴挑(丘 melanandra Franch)、小叶猕猴挑“．1anceolata Dunn)、中华猕猴桃(A ch／nens／s Planch．)等混用为猫人参，影响了本品的品质和疗效．因此，当务之急首先要确 定正品猫人参的原植物，并准确鉴别其与混淆品：其次猫人参的近缘种能否代用， 以扩大目前严重紧缺的药源。基于此目的，本文考证了猫人参原植物，系统鉴别 了猫人参及其混淆品，研究了猫人参有效部位HPLC图谱与体外抗肿瘤活性，分 析比较了猫人参及其混淆品的矿质元素，确认了猫人参猫草反应的化学物质。 1、原植物考证 通过民间与市场调查、药材性状与原植物形态鉴定、文献查阅，根据原植物 形态、药用历史和学名发表时问，明确了正品猫人参的主要来源应为大籽猕猴桃， 面对萼猕猴桃可能只是其次要来源。 2、种质鉴别 从原植物形态、生药性状、荧光反应、紫外光谱，荧光光谱、傅立叶变换红 外光谱(FLIR)．PCR—RFLP等角度系统地鉴别了大耔猕猴桃及其近缘种，尤其 是形态相似而一直被认为是猫人参原植物的对萼猕猴桃。大籽猕猴桃与对萼猕猴 桃等近缘种的形态差异主要在繁殖器官花果上，因此营养生长期较难鉴别．以生 药性状为基础，结合9种猕猴桃生药的蒸馏水、乙醇、氯仿、石油醚提取液在 254 nm、365 nm紫外光激发下的荧光颜色，4种提取液的紫光光谱，水提液和醇 提液的荧光光谱，完全、准确鉴别了9种药用猕猴桃，编制了鉴定检索表。9种 猕猴桃红外谱图总体较相似，但中华猕猴桃和毛花猕猴桃有强烈末端吸收，明显 区别于其它7种猕猴桃，进一步比较大籽猕猴桃等7种猕猴桃与中华猕猴桃红外 谱图的相减谱图，完全区分了9种猕猴桃，编制了鉴定检索表．限制性内切酶 Ddel，DraI对大耔猕猴桃叶绿体trnK片段的酶切式样具有特异性，建立了大耔 猕猴桃的PCR．RFLP分子指纹图谱，可有效鉴别猫人参混淆品的原植物． 3、体外抗肿瘤活性比较体外抗肿瘤试验结果表明，大耔猕猴桃对供试的3种肿瘤细胞株均有较强的 3、体外抗肿瘤活性比较 体外抗肿瘤试验结果表明，大耔猕猴桃对供试的3种肿瘤细胞株均有较强的 抑制作用，但敏感性存在差异，抑制效果为肝癌SMMC-7221(IC．so=54．22／Hg／m1) 胃癌SGC-7901(133．16∥g／m1)肺癌A549(206．63／Yg／m1)．大籽猕猴桃和 对萼猕猴桃对人肝癌细胞抹SMMC-7221抑制活性差冥显著，后者(217．8599／mi) 仅为前者的1／4．异色猕猴桃、长叶猕猴桃、毛花猕猴、小叶猕猴桃桃对 SMMC-7221的抑制效果均显著优于大耔猕猴桃，尤其是小时猕猴桃的ICso达到 6．53／zg／m!，活性相当于大籽猕猴桃的8倍，是本研究的重大发现，值得迸一步 研究。在人胃癌细胞株SGC-7901、人肺癌细胞株A549试验中，9种供试材料仅 大籽猕猴桃和对萼猕猴桃有一定的抑制作用，而且二者活性相当，差异不显著． 基于活性分析结果，我们建议在治疗胃癌和肺癌时，大籽猕猴挑和对萼猕猴 桃活性接近，均可作猫人参入药，其它种类不宜混用；而治疗肝癌时，大籽猕猴 桃的活性明显高于对萼猕猴桃，对萼猕猴桃不宣作猫人参入药，或者至少须用量 加倍