慢性脑缺血大鼠OXR的表达及天麻钩藤饮的干预-神经病学专业毕业论文.docxVIP

郑州人学2007如；I[61 郑州人学2007如；I[61 It学砭论文 中文摘要 习记忆障碍的作用。另有研究表明天麻钩麟饮能通过降低NMDA受体活性、抑 制兴奋性氨基酸神经毒性等途径发挥脑保护作用。 鉴于以上考虑，本研究首先通过结扎双侧颈总动脉法建立慢性脑缺血大鼠模 型，采用免疫组化、免疫荧光双标组化技术观察慢性脑缺血大鼠脑组织OXtR、 OX2R的表达及其随缺血时问的变化，探讨慢性脑缺血能否导致OXR表达变化及 其意义。在上述研究的基础上，探讨天麻钩藤饮能否通过Orexin系统发挥其脑保 护作用，从而进一步证实天麻钩藤饮对慢性脑缺血的治疗作用。 方法 1．动物分组108只SD大鼠(雌雄各半)，随机分为假手术组、模型组、治 疗组，每组又分为15d、30d、60d三个亚组，每个亚组12只。各假手术组仅行 颈前切开，不结扎颈总动脉，术后立即用蒸馏水(灌胃量与治疗组相当)灌胃 15d、30d、60d；各模型组分别于建模成功后立即用蒸馏水(灌胃量与治疗组相 当)灌胃15d、30d、60d；治疗组15d、30d、60d分别于建模成功后立即用天麻 钩藤饮(0．59．kg．1．d。)灌胃15d、30d、60d。 2．慢性脑缺血大鼠模型建造参照Yamada等制作慢性脑缺血大鼠模型的方 法制作模型。 3．大鼠学习记忆能力测试采用水迷宫法进行学习记忆功能测定。 4．脑组织切片制备和脑组织OXR的免疫组化表达测定及免疫荧光双标组 化和HE染色观察 各亚组大鼠于各自时间终点断头处死，处死后取脑组织，10％福尔马林固定、 常规石蜡包埋，连续冠状切片。 每只大鼠脑组织标本取连续切片，分别用OXtR、OX2R抗体进行免疫组化 染色。严格按sP染色试剂盒说明书进行免疫组化染色，光镜下采用盲法观察。 镜下在每张切片相同部位的皮质、海马区随机计数5个视野1000个细胞，计出 阳性细胞数。用图像分析仪分析每张切片ox2R在海马周围神经纤维着色的平均 灰度值。 每只大鼠脑组织标本取连续切片分别用OXlR、OX2R抗体与NSE抗体及其 荧光素标记Il抗严格按照免疫荧光双标组化染色步骤对OXR进行免疫荧光双标 组化染色，在激光共聚焦显微镜下观察OXR的表达。 II 郑州人学2007尉预I学位论文 郑州人学2007尉预I学位论文 中文摘要 取各组大鼠脑组织切片严格按照HE染色步骤进行HE染色，在光镜下观察。 5．统计学分析数据均以均数士标准差(X：IZS)表示，应用SPSSl3．0进行单因 素方差分析，取Ct=0．05作为检验水准。 结果 1．行为学评价假手术组15d、30d、60d之问比较无统计学差异(，l0．05)。 模型组15d逃避潜伏期较假手术组15d显著延长(P=0．05)。模型组30d和模型 组60d逃避潜伏期较模型组15d缩短(P．O．05)，但仍大于相应假手术组水平 (尸O．05)，模型组60d的逃避潜伏期虽较模型组30d缩短，但二者之间无统计学 差异(户O．05)。天麻钩藤饮干预组与其相应的模型组相比逃避潜伏期均缩短 (P0．05)。 z慢性脑缺血大鼠OXR的表达假手术组15d、30d、60d之间比较无统计 学差异(尸O．05)。模型组1 5d的OXR表达较假手术组1 5d明显增hl(P0．05)； 缺血15d后OXR表达下降，模型组30d降至假手术组30d水平(PO．05)；模 型组60d OXR表达再次增加，基本达模型组15d水平(P加．05)。 3．慢性脑缺血大鼠OXR的免疫荧光双标组化及HE染色观察OXlR、OXeR 均可与NSE共同表达于神经元。模型组15d较假手术组15d OXR表达明显增加 且着色加深，部分神经细胞已萎缩变形，模型组30d较模型组15d OXR表达明 显下降，大部分神经细胞体积缩小、胞核浓缩、深染、结构不清。模型组60d 较模型组30d OXR表达明显增加，且部分神经细胞已恢复正常形态。 4．慢性脑缺血大鼠OX2R在海马周围神经纤维的表达假手术组15d、30d、 60d之问比较无统计学差异(尸O．05)。模型组15d OX2R神经纤维着色平均灰度 值明显大于假手术组15d(P‘0．05)；缺血15d后平均灰度值下降，模型组30d 降至假手术组30d水平(pO．05)；30d后再次升高，模型组60d虽未达到模型组 15d水平，但二者无统计学差异(，0．05)。 5．天麻钩藤饮对慢性脑缺血大鼠OXR表达的影响治疗组15d，OXR的 表达较模型组15d明显下降(P．O．0S)；治疗组30d，OXR的表达与模型组30d 无统计学差异(P0．05)；治疗组60d，OXR的表达较模型组60d显著升高 (P0．05)。 Ill 郑州人学2007届硕I岩±位论史 郑州人学2007届硕I岩±位论史 中义摘要 结论 1．OXlR、O