黄芪白芍协同保护细胞抗氧化作用研究-农产品加工及贮藏工程专业毕业论文.docxVIP

1．4本项研究目的意义及研究内容 1．4本项研究目的意义及研究内容 ．8 1．4．1研究目的意义 8 1．4．2研究内容 9 2材料与方法 ．．10 2．1材料、仪器与试剂 ．10 2．1．1实验材料 10 2．1．2实验试剂 ．10 2．1．3实验仪器 ．1 1 2．2技术路线 12 2．3试验方法 12 2．3．1实验样品制备 ．12 2．3．2实验细胞的培养条件 12 2．3．3提取物抗氧化能力测定 ．13 2．3．3．1DPPH自由基清除能力测定 13 2．3．4总酚黄酮含量的测定 ．13 2．3．4．1总酚含量测定 一13 2．3．4．2黄酮含量测定 ．．13 2．3．3 MTT实验测定细胞活性 13 2．3．4过氧化氢细胞损伤模型的建立 ．14 2．3．5提取物对体外培养细胞SOD、GSH．Px活性和MDA含量的影响 一15 2．3．5．1实验操作方法 一15 2．3．5．2 MRC．5细胞的SOD活性测定 ．．15 2．3．5．3细胞的GSH．Px活性测定 ．16 2．3．5．4细胞的MDA含量的测定 ．18 2．4统计分析 1 9 3实验结果及分析 20 3．1DPPH自由基清除能力 ．．20 3．1．1黄芪、白芍不同溶剂萃取相的DPPH自由基清除能力 ．20 3．1．2黄芪、白芍不同溶剂萃取相复配DPPH自由基清除能力 表6黄芪白芍不同溶剂萃取相复配清除DPPH自由基能力 2l 万方数据 3．2总酚、黄酮含量分析 3．2总酚、黄酮含量分析 22 3．2．1黄芪、白芍及各溶剂萃取相总酚、黄酮含量分析 ．22 3．2．2黄芪白芍各溶剂萃取相总酚黄酮含量与DPPH自由基清除活性的相关性分析 ．23 3．3黄芪白芍不同溶剂萃取段对MRC．5细胞存活率的影响 ．．24 3_3．1MRC．5细胞H202损伤模型的建立 ．24 3．3．2黄芪、白芍及各萃取相对MRC．5细胞活性的影响 25 3．3．3黄芪、白芍各溶剂萃取相复配对MRC一5细胞活性的影响 33 3_3．4黄芪、白芍氯仿萃取相对细胞SOD和GSH．Px活性及MDA含量的影响 37 4讨论 38 4．1黄芪、白芍各溶剂萃取相清除DPPH自由基活性研究讨论 38 4．2黄芪、白芍各溶剂萃取相总酚黄酮含量变化分析讨论 38 4．3黄芪、白芍各溶剂萃取相对H202引起的MRC．5细胞损伤的修复作用情况讨论一38 4．4本研究的创新点和进一步研究方向 39 4．4．1论文的创新性 ．39 4．4．2进一步研究方向 ．39 5结论 41 参考文献 ．．42 万方数据 山东农业大学硕士学位论文中文摘要 山东农业大学硕士学位论文 中文摘要 配伍是中药的常用手段，在中药使用过程中具有非常重要的意义。黄芪一白芍药对 作为中药中的经典药对，其应用十分广泛，疗效和作用确切，具有很高的临床应用价值。 本实验首先采用DPPH自由基清除实验验证了黄芪、白芍各溶剂萃取相及各相的抗氧化 活性，然后又测定了各溶剂萃取相的总酚黄酮含量，并分析了总酚黄酮类物质的含量与 抗氧化能力间的关系，最后采用细胞实验研究了黄芪白芍及各溶剂萃取相对H202导致 的细胞氧化损伤的修复作用。 本实验首先测定了黄芪、白芍不同溶剂萃取相的DPPH自由基清除能力，通过实验 我们发现，各溶剂萃取相对DPPH自由基都有一定程度的清除能力，其中黄芪各溶剂提 取物中以黄芪氯仿相和乙酸乙酯相对DPPH自由基的清除能力较强，以黄芪水相对 DPPH自由基的清除能力最弱，其余两相的DPPH自由基清除活性介于三者之间；白芍 各溶剂萃取相中以白芍乙酸乙酯相对DPPH自由基的清除能力最强，以白芍水相对 DPPH自由基的清除能力最弱，其余三相的DPPH自由基清除能力介于二者之间；黄芪 白芍各溶剂萃取相复配后，清除DPPH自由基的活性都有不同程度的增长，与理论值相 比存在显著性差异(P0．05)，这说明复配对各相抗氧化能力的增强具有显著的协同 性。 本实验还测定了黄芪、白芍及各溶剂萃取相的总酚和黄酮类物质的含量，实验发现， 白芍提取物中的总酚类物质含量要高于黄芪提取物，而黄酮类物质含量则低于黄芪提取 物。黄芪、白芍各溶剂萃取相中总酚和黄酮类物质的含量具有相同的变化规律为乙酸乙 酯相氯仿相正丁醇相石油醚相水相：各溶剂萃取相复配后其总酚和黄酮含量都 有显著增长，这说明复配在增加各相总酚和黄酮类物质含量方面具有显著的协同效应。 通过MTT实验发现，在一定的浓度范围内，黄芪、白芍及各溶剂萃取相对H202 造成的细胞损伤都有一定程度的修复作用，当各溶剂萃取相复配使用时，对细胞损伤的 修复作用越强。通过测定SOD和GSH．Px活性及MDA含量发现，萃取相能有效增强受 损细胞的SOD和GSH—Px活性，降低MDA含量，这在细胞水平上证明了中药在应对氧 化胁