美花圆叶筋骨草的化学成分与质量研究中药学专业毕业论文.docxVIP

成都中医药大学博士学位论文 成都中医药大学博士学位论文 I I 美花圆叶筋骨草的化学成分与质量研究 摘 要 美 花 圆 叶 筋 骨 草 为 唇 形 科 筋 骨 草 属 植 物 美 花 圆 叶 筋 骨 草 Ajuga ovalifolia Bur.et Franch.var.calantha(Diels)C.Y.Wu et C.Chen 的 全 草 ，为 藏 药 达 巴 巴 来 源 之 一 。可 用 于 治 浮 肿 后 流 黄 水 、关 节 积 黄 水 、骨 松 质 发 炎 、 跌 打 损 伤 、 骨 折 挫 伤 、 筋 骨 疼 痛 和 风 湿 关 节 痛 ， 还 可 用 于 止 血 。 本论文对美花圆叶筋骨草进行了最大耐受试验及镇痛、止血有效部位的筛 选；对美花圆叶筋骨草的化学成分进行了提取分离；对美花圆叶筋骨草中的挥发 油进行了 GC-MS 分析；对美花圆叶筋骨草中的三个黄酮类成分进行了含量测定； 用高效液相色谱法（HPLC 法）对美花圆叶筋骨草的指纹图谱进行了研究。主要 研究结果包括如下几个方面： 1、通过美花圆叶筋骨草急性毒性试验和最大耐受量试验可知：美花圆叶筋 骨草水提物和美花圆叶筋骨草醇提物最大给药量均为 30g 生药/ k g 体重，约为 临床患者用量的 200 倍，美花圆叶筋骨草水提物和美花圆叶筋骨草醇提物无明显 毒理反应，是安全可靠的。通过美花圆叶筋骨草镇痛止血的药理学筛选可知：美 花圆叶筋骨草水提物和美花圆叶筋骨草醇提物具有不同程度的镇痛止血功能。 2、通 过 提 取 分 离 ，从 美 花 圆 叶 筋 骨 草 的 石 油 醚 部 位 和 乙 酸 乙 酯 部 位 得到 8 个 单 体 （ Ⅰ ～ Ⅷ ）， 鉴 定 出 其 中 7 个 化 合 物 （ Ⅱ ～ Ⅷ ） 的 结 构 。 其 中 ， 化 合 物 Ⅱ 鉴定为乌苏酸（usolic acid）；化合物Ⅲ 鉴定为β-谷甾醇 （β-sistosterol）；化 合 物 Ⅳ 鉴定为芫花素(genkwanin)；化 合 物 Ⅴ 鉴定为木 犀草素（luteolin）；化合物Ⅵ 鉴定为芹菜素（apigenin）化 合 物 Ⅶ 鉴定为胡 萝卜苷(daucosterol)；化 合 物 Ⅷ 鉴定为 Breviflorasterone。7 个化合物均为 首次从美花圆叶筋骨草中得到。 3、对美花圆叶筋骨草的挥发油进行了 GC-MS 分析。在美花圆叶筋骨草挥发 油的 GC 图中,出现 34 个峰,经 MS 分析后指认了其中 29 个，含量占挥发油总量的 98.12％。其中脂肪族烯醇类成分 6 个，占总量的 39.63％，脂肪酸类成分 5 个， 占总量的 49.42％，萜类成分两个。挥发油中的主要成分为[Z,Z,Z]-9,12,15-十八 碳三烯-1-醇，含量为 34.39％；正十六酸（棕榈酸），占 42.79％。 4、通过方法学考察建立了 HPLC 法同时测定美花圆叶筋骨草中芫花素和芹菜 II II 素含量的方法。固定相：C18 色谱柱；流动相：甲醇-0.1％冰醋酸水溶液（80： 20），流速：1.0ml/min；检测波长为 269nm。 芫花素的标准曲线方程为：A= 3093979x - 45295 （r=0.9999）。进样量在 0.1248μg～1.248μg 范围内，芫花素峰面积值与进样量有良好的线性关系；精 密度试验、重复性试验、回收率试验的 RSD 均小于 2.0％，符合规定。 芹菜素的标准曲线方程为：A=3031649X+146083（r=0.9997）。进样量在 0.1296μg～1.296μg 范围内，芹菜素峰面积值与进样量有良好的线性关系。精 密度试验、重复性试验、回收率试验的 RSD 均小于 2.0％，符合规定。 通过方法学考察建立了 HPLC 法测定美花圆叶筋骨草中木犀草素含量的方 法。固定相：C18 色谱柱；流动相：甲醇-0.1％冰醋酸水溶液（70：30），流速： 1.0ml/min；检测波长为 350nm。木犀草素的标准曲线方程为：A= 3318415x - 70716 （r=0.9996）。进样量在 0.1264μg～1.2640μg 范围内，木犀草素峰面积值与进 样量有良好的线性关系。精密度试验、重复性试验、回收率试验的 RSD 均小于 2.0％，符合规定。 用建立的方法测定了三批样品，按干燥品计，芫花素含量为 0.058％～ 0.073％；芹菜素含量为 0.069％～0.085％；木犀草素含量为 0.092％～0.123％。 5、以木犀草素为参照物，建立了 HPLC 法测定美花圆叶筋骨草的指纹图谱的 方法：以 C18 柱为固定相；流动相为：乙腈-0.1%冰乙酸水溶液梯度洗脱，梯度为： 15：85～35：65（0min～30min）；35：65～80