棉花腺苷酸核糖基化作用因子1基因（arf1）的克隆及其启动子的功能鉴定-作物遗传育种专业毕业论文.docxVIP

摘 要 棉花生殖器官特异表达的基因 对棉花的经济产量 尤其对棉纤维内在品 质性状的建成可能起到重要作用 因此 研究棉花生殖器官特异表达的基因 并分离相关基因的启动子和基因表达特异元件 对认识棉花的育性 纤维发育 以及经济产量形成的分子机理具有重要意义 论文中用本实验室建立的新型染 色体步移技术 同尾酶反向 PCR 和快速分离目的基因 cDNA5’ 未知序列方法 从陆地棉品系 Y18 中分离到腺苷酸核糖基化作用因子 1 (arf1)基因的全长 cDNA DNA 和启动子序列国内外均未见报道Southern 杂交结果表明 该基因在棉花基因组中有两个拷贝 Northern 杂交结果表明 该基因在棉花的 蕾 花 纤维和铃壳等生殖器官中呈优势表达 这说明 arf1 参与对整个生殖器 官分化和发育的调控 是一个生殖器官优势表达的基因 替换剪接现象在高等真核生物的生长 发育和基因的表达调控起到重要作 用 但到目前尚未见到在棉纤维发育过程中基因的替换剪接现象的报道 本研 究的 RT-PCR 和 Nothern 结果都证实棉花 arf1 基因内存在替换剪接现象 形 成三种 mRNA 该基因启动子区域具有 Initiator TATA box CCAAT box 和 GC box 等典型的启动子特征序列 还有一些特异的反向重复结构和回文序 列 这些信息提示该启动子具有很强的启动活性和组织器官特异性 目前转基因抗虫棉所用的启动子是 CAMV35S 启动子 它在棉花的生殖 器官表达量很低 要从根本上解决这一问题 就需要应用棉花生殖器官优势 表达启动子来驱动杀虫基因在棉花的生殖器官中表达 以棉花品系 Y18 的基 因组为模板 利用 PCR 技术 得到启动子片段 与 pBI121 载体上的 gus 报告 基因融合 构建植物表达载体 命名为 Parf-P- pBI121 利用花粉管通道法将质 粒转化棉花 Kan 检测获得 13 株阳性植株 通过 PCR 检测 证明外源的 arf1 启动子及 gus 基因己经整合到棉花的基因组中 对 gus 进行组织化学分析结果 表明 arf1 具有生殖器官表达特性 为实现杀虫基因在棉花蕾 花 铃等器官 中的表达提供了理想的启动子 关键词 棉花, 腺苷酸核糖基化作用因子 1 arf1 基因 ,替换剪接,启动子,转基 因植株 新疆农业大学硕士学位论文 Abstract The genes diaganostic expression to cotton reproductive organ showed a significant role in the economic yield of cotton, especially to the construction of cotton quality characters in fiber, therefore, studies on these genes and isolation of the gene promoters and gene expression proper elements had the important significant for understanding fertility of cotton, fiber development and molecular mechanism of forming economic yield of cotton. The full-length cDNA, DNA and promoter of ADP-ribosylation factor 1(arf1) was isolated from Gossypium hirsutum Y18 by means of isocaudarner inverse PCR(II-PCR) and rapid isolating cDNA 5’ unknown sequence and promoter(RICUP) was established in our lab(unreported home and abroad). The results by Southern blotting analysis showed the gene had two copies in cotton genome, and results by Northern blotting indicated the predominant expression of arf1 in reproductive organs of cotton , including bud, flower, fiber and boll. Alt