酶法制备低聚葡甘露糖和低聚半乳糖工艺研究-化学工程专业毕业论文.docxVIP

i i 摘要 功能性低聚糖不能被消化酶降解，也不能被直接吸收利用，但能选择性增 殖益生菌，对机体产生有益影响。低聚葡甘露糖和低聚半乳糖是两种重要的功 能性低聚糖，工业上均采用酶法制备：β-甘露聚糖酶水解甘露聚糖制备低聚葡 甘露糖；β-半乳糖苷酶催化乳糖合成低聚半乳糖。 β-1,4-D-甘露聚糖酶（EC 3.2.1.78，β-1,4-D-mannan mannohydrolase，简称 β-甘露聚糖酶）是水解 β-1,4-D-甘露糖苷键的内切酶，可水解魔芋甘露聚糖生成 低聚葡甘露糖。本文通过响应面法优化了枯草芽孢杆菌发酵培养基组成，最优 组合为（g/L）：魔芋 34.68，(NH4)2SO4 4.69，Na2HPO4?12H2O 4.00，KH2PO4 0.30，CaCO3 2.69，CaCl2 1.00，NaCO3 1.00，MgCl2?6H2O 0.60，优化后发酵液 酶活从 120.42U/mL 提高到 153.75U/mL，增值了 27.68 %。 枯草芽孢杆菌 β-甘露聚糖酶为中温酶，最适 pH 为 7.0，最适温度为 60oC。 采用离心和絮凝等纯化方法制得 β-甘露聚糖酶，并用于水解魔芋制备低聚葡甘 露糖。酶法制备的低聚葡甘露糖聚合度为 2~10，其中低聚三糖含量最高，聚合 度主要为 2~4 的低聚糖占 61.84%。 β-D-半乳糖苷酶（EC 3.2.1.23, β-D-galactoside galactohydrolase，简称 β-半 乳糖苷酶）可特异性地水解 β-D-半乳糖苷键，同时还有转糖苷活性，可催化乳 糖生成低聚半乳糖。本文对产 β-半乳糖苷酶菌株进行 26S rDNA 生物学鉴定， 表明该菌株为乳酸克鲁维酵母（Kluyveromycs lactis）。K.lactis 在中性条件下生 长（pH5.0~8.0），乳糖对 K.lactis 分泌 β-半乳糖苷酶有诱导作用。由于 β-半乳 糖苷酶为胞内酶，较难提取，采用乙醇处理 K.lactis 细胞改变其通透性，制得透 性化细胞。考查了处理条件对透性化细胞制备的影响，最佳处理条件为：室温 下乙醇处理 1min，乙醇加入量为 40%。对透性化细胞 β-半乳糖苷酶进行表征， 其最适 pH 和温度分别为 8.0 和 37oC，Mg2+、Pb2+等离子能提高其酶活。 比较了商品化酶和透性化细胞催化合成低聚半乳糖的能力，以 500g/L 乳糖 为底物，酶促反应一定时间（商品化酶 30min，透性化细胞 1h），最大低聚糖 产量分别为 60g/L 和 95g/L，相比而言 K.lactis 透性化细胞具有更好的催化合成 低聚半乳糖的能力。 关键词：枯草芽孢杆菌、β-甘露聚糖酶、低聚葡甘露糖、乳酸克鲁维酵母、 β-半乳糖苷酶、低聚半乳糖 ii ii Abstract Functional oligosaccharides are low molecular weight carbohydrates, containing sugar moieties with degrees of polymerization (DP) between 2 and 10. They possess importantly physicochemical and physiological properties, promote a good balance of intestinal probiotics and decrease gastrointestinal infections and serve as prebiotics. The best known functional oligosaccharides include gluco-manoligosaccharides (GMOS), galacto-ooligosaccharides (GOS) and so on. β-mannanase (β-1,4-D-mannan mannohydrolase EC 3.2.1.78) is an important hemicellulase, which can catalyze the hydrolysis of internal β -1,4-D-mannopyranosyl linkages in various β-mannan such as galactomannan, glucomannan, galactoglucomannan. In this study, response surface methodology (RSM) was applied to optimize culture conditions for the production