四甲基吡嗪对肺动脉高压大鼠模型的治疗作用及机制研究.doc

中英文词汇对照表 sGC soluble guanosine cyclase 可溶性鸟苷酸环化 酶 TXA2 thromboxane A2 血栓烷 A2 HE hematoxylin-eosin staining 苏木精-伊红染色 ALT alamine aminotransferase 丙氨酸氨基转移酶 TBA total bile acid 总胆汁酸 BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 DTT dithiothreitol 二硫苏糖醇 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 CPA cyclopiazonic acid 环匹阿尼酸 HBSS Hanks balanced salt solution Hanks 平衡盐溶液 HEPES 羟乙基哌嗪乙磺酸 EGTA 乙二醇二乙醚二胺 四乙酸 SDS 十二烷基磺酸钠 DEPC diethylpyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 Rpm Revolution per minute 每分钟转数 MTT 3-(4,5- 二 甲 基 噻 唑 -2)-2,5-二苯基四氮 唑溴盐 DMSO dimethylsulfoxide 二甲基亚砜 3 万方数据 广州医科大学博士学位论文 四甲基吡嗪对肺动脉高压大鼠模型的治疗 作用及机制研究 博士研究生：陈陈秀庆秀庆 导 师：王王 健 健教授 中文摘要 【研究背景】 肺动脉高压(pulmonary hypertension，PH)是以肺动脉压力进行性升高，继 而引起右心室肥大、右心功能衰竭，并最终导致患者死亡的一大类疾病。其肺 血管的基本病理变化，早期以肺动脉痉挛收缩为主，后期出现以肺动脉内膜、 中膜（平滑肌层）和外膜增厚为主要表现的血管重塑。近年来的研究表明，肺 动脉平滑肌细胞 (pulmonary areterial smooth muscle cells，PASMCs)内钙离子浓 度（[Ca2+]i）、钾离子浓度（[K+]i）升高（包括其各自通道的变化）在肺动脉平 滑肌（pulmonary arterial smooth muscle，PASM）收缩和重塑过程中，起了至关 重要的作用。升高的[Ca2+]i 可与钙调蛋白（calcium modulin，CaM）结合，形 成 Ca2+-CaM 复合物，该复合物进一步结合并激活胞质内的肌球蛋白轻链激酶 （myosin light chain kinase，MLCK），活化的 MLCK 使粗肌丝原肌球蛋白横桥 的肌球蛋白轻链（myosin light chain，MLC）磷酸化（P-MLC），P-MLC 进而激 活横桥 ATP 酶，分解 ATP 提供能量引发肌丝滑动，平滑肌收缩。细胞质或细 胞核中升高的[Ca2+]i 还可激活一些钙依赖激酶（如钙调蛋白激酶，CaMK）及 其他转录因子[如 c-Fos，激活的 T 细胞的核因子(nuclear factor of activated T-cells, NFAT), cAMP 反应元件结合蛋白(response element binding protein, CREB)]等， 促使休眠细胞进入增殖周期，促进 PASMCs 增殖。 细胞内细胞器（如肌质网）释放钙和细胞外液钙通过细胞膜上的各种钙通 道进入细胞，是细胞内[Ca2+]i 增高的两个途径，其中后者起主要作用。细胞膜 4 万方数据 中文摘要 上的钙通道主要有电压依赖性钙通道（voltage dependent calcium channels， VDCCs）、受体操纵性钙通道（receptor operated calcium channels，ROCCs）、钙 池操纵性钙通道（store operated calcium channels，SOCCs）和钠钙交换体 （Na+/Ca2+ exchangers，NCX）等。目前对 ROCCs 结构与功能的研究尚不充分， NCX 功能改变常继发于 VDCCs 和 SOCCs 的变化（具体见本文最后讨论）。目 前研究较为一致的观点是，在肺动脉高压过程中，VDCCs 及 SOCCs 活性和/ 或数量增加，导致细胞外钙离子进入细胞内增多，胞内[Ca2+]i 增加，诱发远端 肺动脉平滑肌细胞持续收缩和增殖，是促进肺动脉高压发生的重要机制之一。 细胞膜电压依赖性 K+通道（Kv）功能降低或表达减少，在促进肺动脉收 缩和增殖方面也发挥着重要作用。钾通道功能降低或表达减少一方面可使细胞 静息膜电位（Em）上升，激活 VDCCs，促进细胞外钙离子内流，升高[Ca2+]i， 引起 PASM 收缩和增殖；另一方面，钾外流减少可使动脉平滑肌[K+]i 增高，高