加味四逆散对抑郁大鼠大脑海马5-HT2AR及其mRNA表达的干预.doc

加味四逆散对抑郁大鼠海马 5-HT2AR 及其 mRNA 表达的干预 前 言 抑郁症是一种以情绪低落为主要表现的严重危害人类身心健康的一类精神疾 病。抑郁症的临床表现：除了心境低落、兴趣丧失、思维迟缓、自我评价过低等 精神症状外,还包括许多躯体不适症状,如疲劳、失眠、食欲不振、性欲减低、头 痛、头晕、口渴、咽喉不适、胸闷、心慌、胃痛、腹胀、大便不通等。1982 年我 国 12地区精神疾病流行病学调查显示，抑郁症等心境障碍终生患病率为 0.76‰， 时点患病率为 0.37‰。1992 年对其中 7 个地区进行的复查显示，抑郁症等心境障 碍终生患病率为 0.83‰，时点患病率为 0.52‰。较 10 年前有所增长。近年来， 随着我国社会经济的发展，生活节奏的加快，人们面临种种生存的竞争，入学、 就业和工作等的压力逐年增加，与物质文明相伴而生的精神沉沦也逐年增多，本 病的发病率有逐年增多和上升的趋势，预计到 2020 年本病的发病将跃升为第二 位，仅次于冠心病，因而被称为新世纪全球第二号杀手[1]。 现代医学认为本病的病因和发病机制尚不清楚，大量研究资料提示遗传因素、 神经生化因素和心理社会因素等对本病的发生有明显的影响。在神经生物化学的 研究中，目前以 5-羟色胺假说较为肯定。对抑郁症的治疗，西药首选选择性 5－ 羟色胺（5-HT）再摄取抑制剂（SSRIs）：代表药物有氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、 西酞普兰等。另外，有 5-HT 和 NE 再摄取抑制剂、NE 和特异性 5-HT 能抗抑郁药、 三环类及四环类抗抑郁剂，以及电休克或改良电抽搐治疗等。并且心理治疗应贯 彻治疗的始终。 中医认为本病的发生和五脏相关且以肝为主，肝喜调达而恶抑郁，肝之疏泄 不及，则气机不利，阳气内郁而为病；肝郁日久，木克脾土，导致肝郁脾虚；肝 郁日久，反侮肺金，影响到肺升发和肃降，则可导致悲忧善哭，少气乏力症状。 也可影响到心肾。可兼见痰、浊、瘀血阻滞。治疗主要用疏肝解郁，调理气机的 方法为主。 在治疗上，西药治疗抑郁症虽然疗效肯定，但副作用[2]较大，依赖性大，停 药后易复发，且药物价格昂贵，易使病人治疗中断。故积极寻找治疗抑郁症的替 代药物是目前科学界面临的重大课题之一。本研究是在导师前期的研究基础上[3]， 进一步研究加味四逆散治疗抑郁症的作用机理。 4 材料与方法 材料与方法 1 实验材料 1.1 试剂和仪器 1.1.1 试剂 4%多聚甲醛固定液、无水乙醇（分析纯）、多聚甲醛（分析纯）、酒精（浓度 分别为：50％、70％、80％、85％、90％、95％、）、二甲苯、石蜡、双蒸水，以 上均由河南中医学院病理实验室提供； 免疫组化染色试剂盒； HTR2AR 原位杂交检测试剂盒； DAB 显色试剂盒； 5-HT2AR 寡核苷酸探针杂交液； 缓冲液（3%宁檬酸、2×SSC、0.5×SSC、0.2×SSC、20%甘油）； 以上均由武汉博士德生物工程有限公司提供。 仪器 温度计（0～100℃）、手术剪、眼科剪、眼科镊、血管钳、秒表、注射器（5ml）、 量桶（50ml、100ml、250ml、1000ml）、电迷宫、大鼠固定器、塑料桶、配药桶、 灌胃器。 敞箱（自制），底面为正方无盖空体，长×宽×高（80cm×80cm×40cm），底面 由面积相等，边长为 16cm 的正方形 25 块组成（用记号笔划线分开）。 动物游泳器（自制），底面直径为 60cm，高 80cm 的圆柱型钢桶做成，选用 不锈钢材料，自制而成。 大鼠摇晃器（自制），截面口直径为 40cm,身长为 80cm。选用材料，不锈钢 铁皮，自制铁皮带中柱摇晃桶，配可摇动支架，内部格开 5 个隔档，内面光滑， 对大鼠无任何创伤。 杂交仪，CSA22.2NO1010-1 型； 全自动组织脱水机，CSA22.2NO10－203 型； 冷冻切片机，（德国）莱卡 LK-100 型； 电子天平，（上海）YP1201N 型； 光学显微镜（日本）奥林巴斯 256 型； 显微照相装置（莱卡系统装置 K－0014 型）； 图象分析仪（日本）奥林巴斯 256 型； 5 加味四逆散对抑郁大鼠海马 5-HT2AR 及其 mRNA 表达的干预 恒温箱，（上海 RC-50C 型）40～60℃； 冰箱，海尔 V66-1 型； 烤箱，新飞 GM580 型（60℃±5℃）； 可调移液器，上海医疗设备厂（0.5-10μl，20-50μl，50-100μl）； 电子恒温水浴锅；上海医疗设备厂 sinme256-001 型； 微波炉,新飞 G10-001 型。 药物 盐酸氟西汀胶囊（别名：开克），10mg/粒。批号：国药准字 生 产批号 生产厂家：常州四药制药有限公司，购於张仲景大药房。 精品白沙糖：购於