锰超氧化物歧化酶转基因治疗直肠癌围手术期放射性肠炎的研究-普外科专业毕业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完 全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名： 争色曰期：—斗 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 (保密}八文在解密后应遵守此规定) 一淖函臌名挫日 期： 山东大学硕士学位论文锰超氧化物歧化酶转基因治疗直肠癌围手术期放射性肠炎的研究 山东大学硕士学位论文 锰超氧化物歧化酶转基因治疗直肠癌围手术期放射性肠炎的研究 研究生郭洪亮 导师 孙靖中教授 中文摘要 【目的】直肠癌术后局部区域复发是其治疗失败的主要原因之一。围手 术期放射治疗可降低直肠癌术后局部区域复发从而提高生存率。但放射治疗 可导致小肠急慢性放射损伤，其发病率高达5％一10％，高于50Gy的照射， 小肠放射性损伤发病率高达25％。本研究的目的是探讨一种避免或减轻肠 道放射性损伤的有效方法，保证患者放射治疗期问的营养状况。我们应用无 毒性复制缺陷的单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)作为载体转染小 鼠小肠上皮使其过度表达锰超氧化物歧化酶(Manganese Superoxide Dismutase，MnSOD)，该酶可清除因放射诱导而导致小肠放射性损伤的超氧 阴离子自由基(0 2。)，从而保护小肠免受放射性损伤。以求明确小肠放射性 损伤的发病机制，为以后提高直肠癌的治疗效果，降低直肠癌围手术期放射 性肠炎的发病率提供基础理论依据。 【方法】应用无毒性复制缺陷的单纯疱疹病毒作为锰超氧化物歧化酶和 ／或绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein，GFP)基因载体转染小鼠小肠 上皮；应用逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)，免疫荧光技术及酶活性检测 法检验MnSOD在小鼠小肠上皮细胞内的表达及活性。组织病理学检测放射 治疗前后不同的时间点小肠绒毛的长度及面积，并统计学分析是否具有显著 性差异。 【结果】 免疫荧光及逆转录聚合酶链式反应(RT．PCR)证实MnSOD和／或GFP 在小肠上皮细胞过度表达：酶活性检测表明MnSOD活性显著增高。照射后 山东人学硕士学位论文24或72小时取标本，病理学检查证实对照组小肠绒毛长度在照射后第 山东人学硕士学位论文 24或72小时取标本，病理学检查证实对照组小肠绒毛长度在照射后第 天，第三天分别降低了40一59％、44—65％：而MnSOD组小肠绒毛长度则分 别降低3．12％、6-29％， 两者具有明显差异(p0．005)。对照组小肠绒毛 两积照射后第一天，第三天分别降低了81％、84％： 丽MnSOD(108 PFU) 组小肠绒毛面积则分别降低了1 7％、 34％，两者具有明显差异(p0．001)。 【结论】我们证实通过无毒性复制缺陷的ItSV作为载体可有效的转染 MnSOD。小肠上皮内MnSOD的过度表达具有显著的放射性保护作用，其放 射保护作用呈剂量依赖性，即随HSV浓度的增加，其保护作用增加。该研 究为临床预防和治疗直肠癌围手术期放射性肠炎提供了新的有效手段。 【关键词】：锰超氧化物歧化酶(MnSOD)；无毒性单纯疱疹病毒载体 (HSV)； 直肠癌； 围手术期； 放射性肠炎 一一———————————————————————一 一一———————————————————————一一一些查查堂堡主堂焦婆奎 一一—— GENE TRANSFER OF HUMAN MANGANESE SUPEROXIDE DISMUTASE PROTECTS SMALL INTESTINAL VILLI FROM RADIATION INJURY IN TREATMENT OF RECTAL CANCER Postgraduate：Guo Hong Liang Tutor： Sun Jing Zhong ABSTRACT 【O bjective】Local recurrence after operation in patients with rectal carcinoma is the main cause of death It has been suggested that pre or postoperative