慢病毒载体介导的hbFGF基因修饰骨髓间充质干细胞治疗肢体缺血的实验研究-外科学(普科)专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目录 CONTENTS 主要英文缩略索引(Main English abbreviation index)……………………………1 中文摘要(Chinese abstract)……………………………………………………… 2 英文摘要(English abstract)…………………………………………………………4 论文正文(Text) 引言(Introdction)………………………………………………………………6 材料与方法(Materials and methods)………………………………………… 8 结果 (Results)…………………………………………………………………15 讨论(Discussion)………………………………………………………………23 结论(Conclusions)…………………………………………………………… 30 参考文献(References)…………………………………………………………31 致谢(Acknowledgements)………………………………………………………… 35 综述(Review)……………………………………………………………………… 36 综述参考文献(References of the review)………………………………………… 41 3 主要英文缩略索引(Main English abbreviation index) 缩写 英文 中文 BMSC Bone marrow stem cell 骨髓间充质干细胞 d day 天 DMEM Dulbecco’s minimum essential medium Dulbecco 极限必须培养基 GFP Green gluorescent protein 绿色荧光蛋白 h hour 小时 hbFGF Humen basic fibroblast factor 人源性碱性成纤维生长因子 min minute 分钟 PAD peripheral arterial disease 外周动脉疾病 PAGE polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS Phosphate-buffered asline 磷酸盐缓冲液 VEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 1 慢病毒载体介导的 hbFGF 基因修饰骨髓间充质干细胞治疗肢体缺血的实验研究 摘要 目的 探讨以慢病毒为载体介导人碱性成纤维生长因子（human basic fibroblast growth factor,hbFGF）基因修饰骨髓间充质干细胞（bone marrow stem cell,BMSC ）治疗肢体缺血的可行性。 方法 1、 采用密度梯度离心方法获取 SD(Sprague Dawley)大鼠 BMSC，用含有 10%胎牛血清的 DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)作为培养基，获取第 3—5 代 BMSC。 2、 以慢病毒构建人碱性成纤维生长因子基因载体，转染大鼠 BMSC，获取 人碱性成纤维生长因子基因修饰 BMSC。 3、 24 只 SD 大鼠均切除右侧股动脉及其分支，形成后肢缺血模型鼠。成模 后随机分为 4 组（每组 6 只）：bFGF-BMSC 组，缺血后肢肌内多点注射 bFGF 基因 修饰的 BMSCs；GFP-BMSC 组，缺血后肢肌内多点注射携带绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）空载病毒转染的 BMSCs;BMSC 组，缺血后肢肌内多 点注射普通 BMSCs；PBS 组，肌内注射与前者等体积的磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）。 4、 细胞移植 4 周后，取内收肌和腓肠肌组织，一部分用于冰冻切片，记数 微血管密度并观察移植细胞的改变；另一部分用于 western blot 实验，检测 bFGF 、VEGF 等在动物体内的表达。 结果 1、 通过密度梯度离心方法，可获得相对纯化的 BMSC。 2、 BMSCs 接受慢病毒转染 2d 后，在荧光显微镜下观察到强烈的绿色荧光 。 3、 细胞移植 2 周后，受体动物体内可见绿色荧光阳性细胞，其中 GFP-BMSC 组，GFP+细胞数（15.4±3.85）个/视野低于 bFGF-BMSC 组（26.6±3.51）个/视 野（t=4.811，P=0.001） 2 4、 干细胞在体内分化为血管内皮细胞，但是 GFP-BMSC 组的 GFP+CD31+细胞 数（7.0±2.12）/视野低于 bFGF-BMSC 组（14.0±1.58）/视野（t=5.916，P=