绿草履虫中国品系及其共生绿藻分子系统发生地位的初步探讨-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

II II 本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合安徽师范大学硕士学 位论文质量要求。 答辩委员会签名： 主席：（工作单位、职称） 委员： 导师： III III 绿草履虫中国品系及其共生绿藻 分子系统发生地位的初步探讨 摘要 许多纤毛虫体内有单细胞真核绿藻共生，这个现象是进化生态学、进 化生物学和细胞生物学等领域具有较高科研价值的特殊生物学现象。纤毛 虫-真核绿藻共生体的生物学意义已经明确即宿主与共生绿藻为互利共生， 但该类共生体的起源时间及进化机制目前仍未阐明。绿草履虫具备在实验 室易培养和无性分裂繁殖速度快等优点，已成为重要模式生物。基于此， 本研究针对本实验室在我国西部地区采集到的一株绿草履虫及其共生单 细胞绿藻进行了以下实验工作： 首先挑单只绿草履虫个体培养建立绿草履虫中国品系单克隆无性繁 殖系。为探索绿草履虫中国品系的系统发生地位，克隆了绿草履虫中国品 系4种核基因（ITS1-ITS2-28S rDNA，组蛋白H4基因，核苷二磷酸还原酶 基因及ATP依赖性RNA解旋酶基因）和线粒体COI基因，基于这些分子数 据重建的系统发生树显示从世界不同地区采集的绿草履虫并没有按照采 集地地理位置的远近而产生地理特异性集群，造成这个现象的主要原因可 能是绿草履虫形成的包囊通过空气流动而扩散。 另外，为探讨绿草履虫中国品系共生绿藻的系统发生地位，首先把共 生绿藻从绿草履虫体内提取和纯化，然后采用本实验室改良的方法提取和 纯化共生绿藻总 DNA。在此基础上，扩增绿草履虫中国品系共生绿藻核 18S rDNA 序列及 4 种叶绿体基因（chlB 基因、rbcl 基因、16S rDNA 及 23S rDNA）部分序列。PCR 产物经分子克隆后测序，获得的 19 个 18S rDNA 克隆序列中有不含内含子、含有 1 个内含子和含有 2 个内含子这 3 种类型； 在基于 18S rDNA 序列重建的系统发生树中绿草履虫中国品系共生绿藻的 19 个克隆序列并未聚为一支，其中有 13 个克隆属于共球藻 纲 （Trebouxiophyceae）,而其他 6 个克隆位于绿藻纲（Chlorophyceae）支系， 这个现象揭示了绿草履虫中国品系体内共生绿藻可能有多种起源。基于绿 藻叶绿体基因重建的系统发生树均显示了绿草履虫中国品系共生绿藻与 小球藻属（genus Chlorolla）亲缘关系较近。 关键词：绿草履虫；共生单细胞绿藻；系统发生 PAGE PAGE IV Molecular phylogenetic positions of Chinese green paramecium as well as its endosymbiotic algae Abstract A variety of members of ciliates have established a symbiotic relationship with unicellular eukaryotic algae. In the field of evolutionary ecology, evolutionary biology and cell biology, this specific biological phenomenon has an important scientific value. The biological significance of ciliate-eukaryotic algae symbionts is that the host has a mutualism relationship with endosymbiotic algae, however, the origin time and evolution mechanism still remains ambiguous. Because green paramecium has a high speed of asexually reproduced and is readily cultivated, it has already served as an important model organism. For this reason, we had made the following experiments about the green paramecium strain collected from western china and its endosymbiotic algae: In order to study the phylogenetic placement of Chinese green paramecium, we choo