罗勒多糖抗卵巢癌细胞侵袭转移的体外实验研究-中西医结合基础专业毕业论文.docxVIP

（二）罗勒多糖抗肿瘤侵袭转移作用的前期实验研究 28 四、罗勒多糖抗卵巢癌侵袭转移的可能机制 29 （一）不同氧环境下罗勒多糖对肿瘤细胞生长的影响 30 （二）不同氧环境下罗勒多糖对肿瘤细胞 OPN 表达的影响 30 （三）不同氧环境下罗勒多糖对肿瘤细胞分泌 MMP-2 能力的影响 32 （四）不同氧环境下罗勒多糖对肿瘤细胞侵袭与运动能力的影响 34 结 语 35 参考文献 36 附 录 40 致 谢 43 查新报告 44 PAGE PAGE 1 引 言 侵袭与转移是恶性肿瘤最为显著的特征之一，也是肿瘤临床治疗失败的一个重要 原因。肿瘤侵袭、转移过程涉及细胞增殖活力、细胞凋亡、细胞粘附、基质降解、细 胞运动、血管形成等关键环节，研究各个作用环节是寻找解决肿瘤侵袭、转移的方法、 方药的途径。卵巢上皮细胞癌（ovarian epithelial cancer, OEC）的发病率位于妇 科恶性肿瘤的第二位，但其死亡率却位居首位，导致其治疗失败的主要原因是肿瘤的 侵袭转移，因此，控制转移是决定患者预后的关键因素。随着手术及综合疗法的发展， 对卵巢癌原发病灶的处理有了明显的提高，但对卵巢癌的侵袭转移的治疗，迄今为止 没有可靠的方法，揭示其侵袭转移机制是寻找有效的抗卵巢癌转移药物与方案的基 础。 中医药治疗肿瘤已有几千年的历史，形成了一套独特的理论体系。传统中医药在 改善肿瘤患者生存质量，延长带瘤患者生存时间，减少远处转移灶发生等方面具有独 特优势，经过许多中医药研究者的辛苦努力，大量抗癌中药被发现，并在临床治疗中 取得了一定疗效，已成为肿瘤的手术、放疗、化疗、生物疗法之外的另一重要治疗大 法。因此，积极探讨中医药防治肿瘤转移的思路与方法，开发中药抗肿瘤转移新药具 有重要意义。本课题组一直从事“活血化瘀”药物抗肿瘤的研究，中药罗勒（0cimum basi1icum L）系课题组经长达数年的研究从经典的活血化瘀方中发现的抗肿瘤转移 药物[1]，我们所用罗勒为唇形科植物罗勒的干燥地上部分，经水煎醇沉得到罗勒多糖， 研究证实其具有较强的抗血小板及活血化瘀作用，同时发现该药对几种移植瘤转移模 型（H22 肝癌小鼠模型、Lewis 肺癌小鼠模型、B16 黑色素瘤小鼠模型及 NuTu-19 大鼠 卵巢癌模型等）均具有明显的抗转移效果[2,3]。对该药的抗肿瘤临床与基础进行了系 统的研究，疗效最为显著的是荷瘤 NuTu-19 大鼠卵巢癌模型。NuTu-19 大鼠卵巢癌模 型与人卵巢癌的生物学表象极为相似，是抗卵巢癌药物临床前研究的最佳模型。前期 研究资料显示，经罗勒多糖治疗组大鼠血性腹水、大网膜及腹壁等转移结节明显减少， 罗勒多糖能提高转移动物生命延长率，能对抗化疗药的毒副作用，提高机体免疫功能。 由于肿瘤侵袭转移不仅与肿瘤细胞有关，更是肿瘤细胞和肿瘤组织微环境复杂的相互 作用的结果[4]，而肿瘤细胞恶性增殖与血液供应紊乱常导致血液供应不足，造成肿瘤 局部乏氧，使肿瘤细胞更具侵袭性，容易发生远处转移，因此，为了更好地模拟体内 肿瘤细胞所处的微环境，我们不仅建立了体外细胞学研究的常氧环境（21%O2、5%CO2）， 而且还建立了乏氧培养环境（1%O2、5%CO2 和 94%N2），并初步探讨了氧环境对罗勒多 糖抗肿瘤侵袭转移作用的影响。 本研究首先通过形态观察、细胞凋亡-Hoechst33258 染色和 MTT 法观察不同氧环 境下罗勒多糖对人卵巢癌 SKOV3 细胞生物学行为（细胞形态、细胞凋亡和增殖）的影 响，另外通过 RT-PCR 技术和免疫细胞化学实验、明胶酶谱分析法、Transwell 小室 实 验 ， 体 外 观 察 不 同 氧 环 境 下 罗 勒 多 糖 对 人 卵 巢 癌 SKOV3 细 胞 骨 桥 蛋 白 （osteopontin，OPN）表达、分泌 MMP-2 水平、细胞迁移运动能力的影响，对罗勒多 糖抗肿瘤侵袭转移作用的可能机制进行了探讨，为此药的进一步开发与临床应用提供 理论依据。本课题将在前期研究的基础上，观察中药干预对卵巢癌癌灶乏氧微环境下 细胞的影响。通过该项研究，分析罗勒多糖的抗肿瘤转移机制与确切的作用靶点，以 期用现代化的研究手段揭示中药治疗的法则，更深入的阐明罗勒多糖抗卵巢癌转移的 机理，为提高卵巢癌的临床治疗疗效提供新思路。 实验研究 第一部分 罗勒多糖对人卵巢癌 SKOV3 细胞生物学行为的影响 一、实验技术路线 二、实验材料 （一）细胞株 SKOV3（人卵巢癌细胞株）为本室常规保存，均贴壁生长。 （二）样品与试剂 1.样品 罗勒多糖：由北京四环科宝制药有限公司提供，规格：胶囊剂 0.15g/粒 ，成人 用量：0.9g/日/人。 2.主要试剂 （1）阳性对照药--姜黄素：ALEXIS 公司