酶法生产壳寡糖及其质量控制研究-食品科学专业毕业论文.docxVIP

2 2 材料与方法 目录 目录 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 1 引言 1.1 立题依据及意义 立题依据 壳寡糖（chitooligosaccharides）是壳聚糖水解后产生的一种聚合度在 2～20 的氨基糖 类化合物，具有良好水溶性[1]。壳寡糖具有提高巨噬细胞吞噬能力[2]、抑制肿瘤细胞生长 [3]、促进双歧杆菌增殖[4]、降低胆固醇[5]、抗氧化[6]和抑菌性[7]等多种独特的生理功效。此 外，壳寡糖还具有良好的吸湿性和保湿性，可以作为果蔬的保鲜剂，日化产品中的保湿剂 等[8]。因此，壳寡糖在食品、医药、农业、日化等领域有着比壳聚糖更广泛的应用前景。 壳寡糖的结构如图 1-1 所示： 图 1-1 壳寡糖的结构 Fig.1-1 Schematic structure of chitooligosaccharides 近年来，壳寡糖作为一种新型的功能性低聚糖，不断引起世界各国的浓厚兴趣。西方 发达国家以及日韩等国家均在壳寡糖的制备和其生理活性的研究方面加大了投入。日本和 欧洲国家已经将壳寡糖作为功能性甜味剂应用到食品工业中，日本出现了以壳寡糖和壳聚 糖为主要成分的健康食品“卡尼斯泰”。国内市场也出现了如奥利奇善胶囊、金舒心壳寡 糖、鲟之宝、灵宝胶囊等壳寡糖产品，市场的需求仍在持续增加。在这种背景下，就需要 加快酶法制备壳寡糖的产业化步伐，降低酶法制备壳寡糖的能耗水平和生产成本，为公众 提供优质且更安全的壳寡糖产品。 本课题是江苏省科技转化专项资金项目“生物酶法制备氨基多糖新型食品添加剂关键 技术研发和产业化”（项目编号：BA2009082）的部分研究内容。 立题意义 我国是甲壳素生产大国，甲壳素资源十分丰富，目前每年约生产 2000~3000 吨。预 计到 2010 年世界对甲壳素的需求将达到 20000 吨，折合价值 30 亿元人民币，加上甲壳素 中间品和衍生品产值将形成 500 亿元的市场规模，按照目前的产量增长将难以满足国内外 急切的市场需求，甲壳素及其衍生品的开发利用前景十分广阔。但我国的甲壳素精深加工 水平不高，产品大多仅限于甲壳素和壳聚糖等用于大量出口到国外的初级加工原料，产品 的附加值低，行业污染较严重。开发壳寡糖是甲壳素和壳聚糖天然资源开发应用的核心问 题之一，而目前壳寡糖产品的研究开发主要集中在日本、韩国等国家，我国对该产品的研 究起步较晚，研究开发力度还远远不够，加强对高附加值甲壳素产品的研究和开发，对扩 大甲壳素的应用范围及提高甲壳素的价值具有重要的现实意义。 1.2 国内外酶法制备壳寡糖研究的现状与存在的问题 壳寡糖的制备方法主要有化学法、物理法、酶水解法，几种方法各有优缺点，且其所 处的研发和产业化阶段不尽相同。其中，化学方法是最早用于工业化生产的壳寡糖制备方 法，该方法的技术要求相对较低，降解快速，也易于实现工业化大生产。然而，化学法的 产率低而且分子量分布较宽、单糖含量高，生产过程中产品的化学结构可能遭到破坏，产 品安全性饱受质疑[9,10]。从生产工艺的角度来说，化学方法的制备条件不易控制、可重复 性差、脱盐工艺复杂[11,12]。物理法主要有超声波法、微波法、γ射线法、光解法等。与化 学法和酶法相比，物理法所具有的优势在于该法操作较为简单、可控性好、污染小，如果 和其他降解方式联合使用可能会取得更好的效果[13]。物理法降解普遍存在的问题是降解 初期的速率较快，后期较缓慢，这意味着降解成更小的寡糖分子需要耗费很长的时间和较 高的能量，单独使用效果不佳，而且设备投资较大，目前仍未见工业化生产的报道。 酶法降解是用专一性酶或非专一性酶对壳聚糖进行降解进而得到分子量较低的壳寡 糖。酶水解法因条件温和、分子量分布相对容易控制且不会导致还原端基的氧化和降解， 反应无需加入大量的化学试剂，对环境的污染较小，是一种公认的比较理想的绿色制备方 法[14]。 1.2.1 酶法制备壳寡糖研究 1.2.1.1 专一性酶水解制备壳寡糖 专一性壳聚糖酶主要存在于细菌和真菌细胞中，包括壳聚糖酶和溶菌酶，以内切作用 方式催化降解壳聚糖分子中的 β-1, 4 糖苷键，生成聚合度为 2～8 的壳寡糖，产生的单糖 很少。 Takashi 等[15]报道了一种固定化壳聚糖酶生产壳寡糖的技术，他们将壳聚糖酶固定化 在支链淀粉包被的磁性纳米颗粒上。这种固定化酶制备壳寡糖的产率达到 40%以上，并 且可以实现酶的回收和重复利用，有助于节省生产成本。 肖玉良等[16]采用多孔聚氨酯泡沫对 Penicillium sp.ZD-Z1 进行了固定化，在鼓泡床生 化反应器中同时产酶和降解壳聚糖，连续进行了 18 批的产酶降解试验，结果发现壳聚糖 酶活力和壳聚糖降解效率能保持稳定，每批产生的壳聚糖酶活力