TFDP3对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡调控的初步研究.docVIP

第四军医大学硕士学位论文 本研究通过免疫组化和原位杂交探索TFDP3 在前列腺癌组织中的表达；通过半 定量 RT-PCR 检测 TFDP3 在前列腺癌细胞中的表达。然后，分别通过 RT-PCR 和 Western blot 初步探索TFDP3 在E2F1 作用后自噬相关蛋白LC3B 基因水平和蛋白水平 的变化，并且利用流式细胞仪检测 TFDP3 与 E2F1 的相互作用对前列腺癌细胞凋亡 的影响。 主要研究内容包括： .通过 NCBI 基因组数据库检索到TFDP3 基因的DNA 序列，利用软件Primer 设计引物。以前列腺癌LNCaP 细胞基因组DNA 作为模板，采用 PCR 技术扩增 TFDP3 片段，长约1244bp。 RT-PCR，原位杂交杂交和免疫组化结果表明，TFDP3 在前列腺癌细胞和组织中均有不同程度的表达。 2．通过转染pcDNA3.1-TFDP3 和PCMV-E2F1-HA 于 LNCaP 细胞后，RT-PCR 和Western blot 检测结果均显示，TFDP3 高表达的LNCaP 细胞中自噬相关基因LC3B 表达水平明显升高；而转染 PCMV-E2F1-HA 后 LNCaP 细胞中 LC3B 水平明显降低 (P0.05)。表明转录因子TFDP3 过表达可以诱导LNCaP 细胞的自噬现象，同时提示 E2F1 和TFDP3 的相互作用可以抑制LNCaP 细胞的自噬功能。 通过流式细胞仪检测TFDP3 与 E2F1 相互作用后前列腺癌细胞凋亡的变化， 可以发现：PCMV-E2F1-HA 重组质粒转染后细胞凋亡率明显上升（P0.05)，而与 pcDNA3.1-TFDP3 共转染后细胞凋亡率明显下降（P0.05）。证实 TFDP3 可以抑制 E2F1 诱导的细胞凋亡。 以上研究我们可以得到如下结论，TFDP3 可以诱导 LNCaP 细胞中自噬基因 LC3B 的表达，同时抑制E2F1 诱导的细胞凋亡，提示TFDP3 诱导的自噬功能和抗凋 亡效应极有能是前列腺癌由激素依赖性向非依赖性转变过程中的关键的自我保护机 制之一。该研究的结果也为TFDP3 是否能作为前列腺癌治疗的靶点治疗提供了新的 研究基础。 关键词：E2F1；TFDP3；前列腺癌；自噬；凋亡 -4- 万方数据 第四军医大学硕士学位论文 Preliminary Study of TFDP3 in Regulating the Autophagy and Apoptosis of LNCaP Cell Candidate for master:Ren lifen Supervisor:Hao Xiaoke Tutor:Ma yueyun Institute for Clinical Laboratory Medicine of PLA, Fourth Military Medical University-Affiliated Xijing Hospital, Xi’an 710032, China Sponsored Programs: National Natural Science Foundation of China (No Abstract Prostate cancer (PCa) is one of the malignant tumor and it is second only to lung cancer in male tumor. A large part of patients were diagnosed in the middle and late period duing to the occuring mostly hidden of prostate cancer, and finally the prognosis was poor. The general way of treating prostate cancer is reducing the androgen level, so as to induce the apoptosis of tumor cells. This treatment at an early stage was effective, but after a period of time almost all of the patients were changed from androgen-dependent prostate cancer into the androgen-independent prostate cancer, which eventually leaded to the progression or metastasis of tum