硫化氢对小鼠胃底平滑肌张力的调控作用及其机制-生理学专业毕业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 上海交通大学博士学位论文上海交通大学 上海交通大学博士学位论文 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外， 本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成 果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明 确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：、当者辜各≥ 日期： 沙盯年r月，日 万方数据 上海交通大学博上学位论文上海交通大学 上海交通大学博上学位论文 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规 定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和 电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将 本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采 用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密口，在一年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密影 (请在以上方框内打“、／”) 学位论文作者签名：南京辱冷3 指导教师签名： 日期：kI岁年髟月翻日 日期汐肜年乒月29日 万方数据 上海交通大学博士学位论文硫化氢对小鼠胃底平滑肌张力的调控 上海交通大学博士学位论文 硫化氢对小鼠胃底平滑肌张力的调控 作用及其机制 摘要 硫化氢(H2S)是一种无色、易燃的酸性气体，具有明显的毒性。 多年来的认识主要局限于其毒性作用。但是近年来的研究发现，硫化 氢在哺乳动物体内广泛存在，而且具有重要的细胞保护作用。其主要 的合成酶，胱硫醚．13．合成酶(cystathionine．p—synthase，CBS)和胱硫 醚-1，-裂解酶(cysta-thionine—Y—lyase，CSE)在哺乳动物的不同组织内 广泛表达，但是有分布的差异。比如，神经细胞以CBS为主要分布， 而心血管系统则主要以CSE为主要分布，在消化道内，结肠、肝脏 主要以CSE为要分布。近年来的研究认为，内源性的H：S是继一氧 化氮(N0)和一氧化碳(CO)之后的第三种气体信号分子，广泛参 与了机体的多种生理与病理过程。例如，H：S调节线粒体内ATP的生 成；此外，H2S通过激活ATP敏感的钾通道调节胰岛素分泌，参与糖 尿病的发生发展过程；H2S还可以通过影响ATP敏感的钾通道在心血 管系统以及呼吸系统发挥作用，尤其H2S在对抗缺氧缺血引起的心肌 损伤中的作用日益受到重视。一方面，H：s激活蛋白激酶c及肌膜 ATP敏感钾通道，保护大鼠心脏对缺血一再灌注引起的损伤；另一方 面，H2S能促进大鼠心肌细胞增殖、血管的平滑肌细胞的增殖迁移。 在消化道，食物的机械性消化依赖于消化道的运动，包括蠕动、 分节运动等运动形式，而消化道运动的主体是消化道平滑肌，本身的 万方数据 上海交通大学博士学位论文张力是消化道运动的基础。消化道平滑肌除了受外来神经、肠神经和 上海交通大学博士学位论文 张力是消化道运动的基础。消化道平滑肌除了受外来神经、肠神经和 体液因素调节之外，也可以通过自身调节机制保持其紧张度。例如， 细胞内的各种生物活性分子，如H2S、NO等可能是自身调节机制的 重要的活性分子。已有研究证实，胃肠道的黏膜、肠神经和平滑肌组 织均有CBS和CSE分布，可以产生内源性的H2 s．此外，结肠内的 细菌分解消化产物的过程中会产生H2s。因此，阐明H2S调控胃肠道 运动及其机制具有重要的生理学以及潜在的临床意义。 本文主要通过电生理学以及分子生物学的方法，研究H2S在小 鼠胃底平滑肌运动调控中的作用及其机制。首先，我们研究了H：S 对平滑肌经典钙依赖性收缩途径——兴奋收缩耦联的影响：利用免疫 组织化学的方法检测了H2S合成酶在小鼠胃平滑肌细胞上的表达情 况；采用离体肌条实验检测H2s对离体肌条张力的影响：采用细胞内 记录的方法检测H2S对平滑肌细胞膜电位的影响；采用全细胞膜片钳 的方法检测H2S对单个平滑肌细胞电压依赖性钾通道以及L．型钙通 道电流的影响；采用钙荧光成像技术检测H2s对细胞内钙离子浓度的 影响。其次，探讨了H2S对NO生成的影响及其作用机制：利用免疫 组织化学的方法检测H2S合成酶和NO合成酶在小鼠胃平滑肌细胞上 的表达情况：采用电化学的方法直接检测组织内H2S和NO的生成情 况；采用离体肌条实验检测H2S和NO对离体肌条张力的影响；采 用蛋白免疫印迹方法检测H2S对NO合成酶活性的调节，同时利用 siRNA干扰细胞内H2S生成，检测其对NO合成酶活性的调节及其调 节机制。 万方数据 上海交通大学博士学位论文研究结果如下： 上海交通大学博士学位论文 研究结果如下： 一、H：s对小鼠胃底平滑肌运动的调控及其离子机制 1．蛋白免疫印迹