利用转基因技术创建紫花苜蓿耐盐新种质的研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

1Illllllllllllll[j982 1Illllllllllllll[j 982 t 本人声明：所呈交的’≯位论文足小人化导!Jjlj的指导卜-进{J：的研究工作及取得的研究成 果。除本文已经注明引用的内容外，论文·l，／fi包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也 不包含为获得内苤直太堂及其他教育机]：；．jfl‘j。≯化或证书In“止川过的材料。与我 l司]一：作的同 志对本研究所做的任何贡献均已征沦文I lIft厂 确的说l{JJ ji：太，J÷谢意。 I：1 期： !!!：0『_ I I 期： 簦锣一盈赶进瑟盟 学位论文作者签名：学位论文作者签名： ]墨垒垒!坚兰：兰 指导教师签名：指导教师签名： 护一 一 在学Jg]f,JtiJI：究成果使用承讲-I 5 小学位论文作者完个了解学校仃父倮17f、使川学f节论义的规定，即：内蒙tii-人学有权 将学位论文的全部内容或部分保健例：向 家仃天机构、部I’j送交学位论文的复印件和磁盥， 允许编入有关数据库进行检索，也可以采川影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文。 为保护学院和导师的知识产权，作者拒学jUJIlJⅡ义得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使 用涉及在学期|’日J主要研究内容或研究成粜，；Ij{觚得内蒙^人。、≯就读期|’uJ导师的同意：若用于 发表论文，版权单位必须并私为内蒙t!i人’、j乏厅I—J‘投稿或公J I：发表。 学位论文作者签名： 抒删憾影：毖鼢 FI 期：竺!：i：! 卜I 期：趁丛笪：』 利用转基因技术创建紫花苜蓿耐盐新种质的研究摘要 利用转基因技术创建紫花苜蓿耐盐新种质的研究 摘要 作物生长、产量和质量受土壤盐渍化限制，已成为世界上的一个普遍问题。 紫花苜蓿(Medicago Sativa L．)是一种优良的豆科牧草，蛋白质含量高，维生素和 矿物质含量丰富，氨基酸种类齐全，且适口性好，在我国北方地区的农牧业生 产和生态建设中发挥极其重要的作用。然而，多数紫花苜蓿品种耐盐能力差， 不合适在盐碱地种植。因此，培育合适在盐碱地种植的耐盐丰产的紫花苜蓿新 品种，充分利用盐碱地，提高牧草产量，是发展农牧业经济和改善生态环境的 有效途径。现代生物技术育种的迅速发展，为培育新的品种提供了高效快捷的 方法。 本研究选择紫花苜蓿阿尔冈金品种为材料，通过转基因技术对其进行了耐 盐性遗传改良，获得了耐盐性提高的新种质。主要研究结果如下： 1、对紫花苜蓿阿尔冈金品种种子发芽期和苗期的耐盐性分析，结果表明225 mmol／L和300 mmol／L的NaCl浓度分别是发芽期和苗期耐盐性筛选的适合浓度。 2、利用花粉管通道法将盐生植物红树(Rhizophora apiculata L．)总DNA 导入紫花苜蓿，获得12株耐盐性强的植株。以供体和受体为对照，对12株耐 盐植株进行RAPD分析，条带的差异性表现为新增条带、供体特异条带和受体 条带丢失。分析引物S178和引物S198在植株Ms．ra3中出现的供体特异条带和 新增条带序列，初步证实外源DNA已经整合到受体的基因组中，而且To代植 株耐盐能力提高可能与外源基因的导入有关。移栽To代耐盐植株至实验地，人 工辅助同株白交授粉，获得T1代种子。225 mmol／L NaCl筛选获得T1代幼苗， T1代幼苗经300 mmol／L NaCl胁迫后测定耐盐相关生理生化指标，结果表明Tl 内蒙古大学博士学位论文代植株耐盐性明显增强。T2代幼苗经O．6％NaCl胁迫处理21 内蒙古大学博士学位论文 代植株耐盐性明显增强。T2代幼苗经O．6％NaCl胁迫处理21 d，获得了T2代耐 盐株系。 3、比较分析了培养基成分(MS培养基、UM培养基、SH培养基)和激素 配比对阿尔冈金品种下胚轴、子叶和子叶节再生的影响，发现子叶节在添加3．0 mg／L 6-BA的SH培养基上适宜遗传转化，生根培养时添加0．5mg／L IBA。在此 基础上，本研究通过农杆菌介导法首次将盐生植物盐角草(Salicornia europaea L．)Na+／H+逆向运输蛋白基因SeNHXl导入阿尔冈金，PCR检测获得36株T0 代转基因植株，移栽温室培养获得6株生长旺盛的植株。RT-PCR检测显示 SeNHXl基因在5个转基因植株中获得了表达。0．6％NaCl胁迫表达外源基因的 5个转基因植株扦插苗后测定耐盐相关生理生化指标，结果表明这5个转基因植 株的多数耐盐相关生理生化指标均优于对照，而且有1个转基因植株 (胁讣mX75)所测定耐盐相关生理生化指标均优于其他转基因植株。加代培养 获得T，代植株，经PCR鉴定筛选获得了T1代转基因株系。 4、首次克隆了紫花苜蓿阿尔冈金盐诱导表达基因MsPRP2启动子序列，大 小为152