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课件:项目检测肿瘤标志物检测.ppt
免疫分析技术介绍 化学发光免疫分析技术(CLIA)是将化学发光体系与免疫反应相结合,用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 放射免疫分析技术(RIA)是将放射性同位素测量的高灵敏度、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合,在体外进行微量分析的一种检测技术。 酶联免疫标记分析技术(EIA)是用酶标记的抗体或抗原,将抗原-抗体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性和专一性结合起来,并通过酶与底物产生颜色,测定光吸收的一种免疫检测技术。 * 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是目前最常用的免疫荧光分析方法。它是利用镧系元素标记抗原或抗体,根据镧系元素的发光特点,用时间分辨技术测量荧光,同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨,可有效地排除非特异荧光的干扰,极大地提高了分析灵敏度。? 免疫胶体金分析技术是以胶体金作为示踪标记物或显色剂,以膜为载体,利用抗体抗原免疫反应,通过层析过程达到在体外进行微量分析的一种技术。? 蛋白质芯片技术是将多种抗体或抗原高密度排列在固定支持物表面上,使样品中的目的蛋白(如抗原)特异性地与之结合,通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表面构建微型生物化学分析系统,对目的蛋白进行定性、定量检测。 免疫分析技术介绍 * 几种标记免疫技术灵敏度的比较 酶标 荧光 放免 发光 灵敏度(mol/L) 10-18 10-15 10-12 10-9 * 几种标记免疫技术线性范围的比较 酶标 荧光 放免 发光 线性范围 105 104 103 102 * 几种标记免疫试剂的有效期比较 酶标 荧光 放免 发光 有效期(月) 18 15 12 9 6 3 0 * 免疫分析技术的优缺点 化学发光免疫分析(CLIA) 酶联免疫标记分析(EIA) 放射免疫分析(RIA) 胶体金免疫分析(试纸条) 时间分辨荧光免疫分析(TRFIA) 蛋白芯片技术 优点 灵敏度高、测定范围宽、稳定性好,检测快速、简便,无放射污染等。 技术成熟,操作简单,成本较低。 灵敏度高、测量范围较宽,试剂成本比较低。 快速,操作简单方便,适合现场和急诊检测。 灵敏度高、检测范围宽,荧光测定结果稳定时间长。 芯片技术的优点是通量高,可以在一次检测中实现多种标志物的联合检测。可以看作是多个化学发光免疫分析或荧光分析的集合。 缺点 目前试剂成本相对比较高。 灵敏度较低,检测范围较窄,干扰因素多,容易出现Hook效应,只能用于定性或半定量检测。 同位素标记半衰期短,试剂盒稳定差,保质期短,具有放射性,对人体有一定的危害,需要严格的防护,对其废弃物也应需要按规定进行处理。 灵敏度不够,只能用于定性检测。 环境中存在的稀土元素会对检测造成较大干扰,尤其是中国为稀土大国,因而对实验室的检测环境清洁度要求很高。 固相载体上同时包被多种抗体/抗原,容易产生交叉反应,结果容易互相产生光干扰,灵敏度和特异性容易受影响。同时这种技术比较新,临床检测项目比较少。 * 化学发光免疫分析因为具有灵敏度高、测定范围宽、使用范围广、检测快速简便,易自动化,并在测试中不使用有害试剂,无放射污染等特点,因此是目前最理想的体外诊断技术之一。 化学发光免疫分析1980’s进入体外诊断领域,第一台全自动检测仪1993年诞生。 化学发光免疫分析技术 * 包被抗原 待测抗体 酶标记的抗体 发光底物 光子计数 (酶免检测颜色变化,采用分光光度计计数) PMT高速放大信号后读数!!! 化学发光免疫分析原理 * 化学发光按化学反应类型分为: 直接化学发光(非酶促化学发光) 吖啶酯系统 鲁米诺系统 间接化学发光(酶促化学发光) 辣根过氧化物酶—鲁米诺系统(HRP系统) 碱性磷酸酶—金刚烷系统(AP系统) 其它 电化学发光 化学发光的检测类型 CH3 C=O O R N+ OH- H+ H2O2 + H2O + R OH 光子 + CO2 + CH3 C=O O R N HO CH3 C=O O R N HOO CH3 O N CH3 O N C=O O 吖啶酯化学发光系统 吖啶酯化学发光系统 吖啶酯标记 : 西门子Siemens Centaur XP CP 雅培Abbott Architect i2000 鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统 H2O2+ NH2 O O NH NH N2 OH- HRP NH2 CO2- CO2- +Photon (425nm) R OH R OH N S R B OH OH 增强剂(Enhancer) 鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物,也可用作辣根过氧化物酶的底物 鲁米诺化学发光系统 鲁米诺直接标记 :索林DiaSoin Liaison
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