桑叶多酚氧化酶分离纯化及其酶学性质的研究-制糖工程专业论文.docxVIP

桑叶多酚氧化酶分离纯化及其酶学性质的研究摘要 桑叶多酚氧化酶分离纯化及其酶学性质的研究 摘要 多酚氧化酶(PPO)分布很广，在微生物、植物、动物至人类都有它的存 在。它在生物体内具有许多重要的生理功能。本文以新鲜桑叶为研究对象， 采用现代分离技术和先进分析测试手段提取、分离、纯化桑叶中的多酚氧 化酶；采用分光光度法和扫描电子显微镜对其的结构、酶学特性以及不同 抑制剂的抑制效果进行研究，探讨该酶活力调控机理，并进行了固定化研 究，以将桑叶的利用价值得到开发，提高其经济价值。主要研究结果如下： 确定了桑叶多酚氧化酶的最佳提取工艺为：Tween80添加量为1．0％， pH值为6．0，提取时间为2h，料液比为1：2。 探讨了桑叶多酚氧化酶的纯化工艺：通过采用在30％和80％饱和度的 硫酸铵分级沉淀处理，使杂蛋白和多酚氧化酶能够初步分离，并使多酚氧 化酶的得率得到提高。PPO粗酶液的进一步纯化采用Sephadex G_75，采用 16×800规格的层析柱、洗脱流速是15mL／h，洗脱第一峰即为桑叶PPO。 测定了桑叶多酚氧化酶的结构、分子量及酶学性质：利用扫描电镜观 察其为纤维状蛋白；它的分子量约为47kD；最适底物为焦性没食子酸；它 的Km值为0．093m01／L；它的最适pH值为7．0；最适温度为40(2；在相同 抑制剂浓度下，总体抑制效果为：抗坏血酸亚硫酸氢钠柠檬酸氯化 镁氯化钠。 研究了桑叶多酚氧化酶的固定化：用浓度为4％海藻酸钠、0．2％戊二醛、 研究了桑叶多酚氧化酶的固定化：用浓度为4％海藻酸钠、0．2％戊二醛、 0．2mol／L的CaCl：固定多酚氧化酶，固定时间2h，交联时间4h，能使固定 化多酚氧化酶的活力达到最大。将多酚氧化酶固定化以后，固定化酶的最 适pH值为6．0，固定化酶在pH5．O～7．0范围内pH稳定性较好；固定化酶 的最佳反应温度为5012，固定化酶对温度的敏感度降低，温度变化对固定 化酶酶活力的影响不大。 关键词：桑叶多酚氧化酶纯化活性固定化 ISOLATION，PURIFICATION ISOLATION，PURIFICATION AND SOME PRoPERTIES oF PoLYPHENOL OXIDASE IN MULBERRY LEAF ABSTRACT Polyphenol oxidase(PPO)is widely distributed in microorganism，plant， animal and human body,it has some important physiological functions in living creatures．In this paper，fresh mulberry leaf was studied with modem isolation technology and advanced methods of analysis and testing to extract，isolate and purify the mulberry leaf PPO；spectrophotometric analysis method and scanning electron microscopy were used to determine its structure，enzymatic properties and inhibitory effects of different inhibitors on it；regulatory mechanism of the PPO activity and immobilization were also discussed，in order to empolder the mulberry leaf PPO and increases its economic value．Main results were： The optimal extraction technics for mulberry leaf PPO were ascertained， 1．O％Tween一80，pH 6．0，extraction time were 2h，the ratio of solid to solvent were 1：2． The purification processes for mulberry leaf PPO were discussed，the classification deposition was disposed using 30％and 80％saturation of ammonium sulfate to isolate the impurity protein from PPO