磷酸二酯酶与绵羊卵母细胞减数分裂成熟-生理学专业论文.docx

摘 摘 要 牛和绵羊在动物胚胎工程、动物克隆和转基因生物反应器等生殖生物领域研究中是很重 要的家畜，但牛和绵羊卵母细胞体外成熟的机制还不是十分清楚。本研究粼-JT磷酸二酯酶 在牛和绵羊卵母细胞成熟过程中的作用。通过此研究迸一步了解卵母细胞成熟的可能机制， 为改善体外培养体系、提高卵母细胞的成熟质量，建立一种类似卵泡环境的生理抑制模型提 供有益的信息。 实验一牛和绵羊卵泡卵母细胞的采集；比较用抽吸法和切剖法采集从屠宰场获得的牛 以及绵羊卵巢卵泡后得到的可用卵母细胞数的差异。用抽吸法抽取了1343个牛卵巢，平均 采集可用卵母细胞4．90枚，卵巢(6312枚／1343卵巢)。切剖162个牛卵巢，平均采集可用卵 母细胞12枚／卵巢(1944；IUl62卵巢)。结果表明两种采集方法采集到的可用卵母细胞数差 异极显著(P0．01)；用抽吸法抽取了132个绵羊卵巢，平均采集可用卵母细胞1．83枚／卵巢 (241枚．／132卵巢)。切剖3952个绵羊卵巢，平均采集可用卵母细胞2．56枚，卵巢(10104 枚／3952卵巢)。结果表明这两种采集方法采集到的可用卵母细胞数差异极显著(P0．01)。 上述结果表明切剖法较抽吸法可获得更多的卵母细胞。 实验二次黄嘌岭对牛和绵羊卵母细胞体外减数分裂的影响：为建立一种可以模拟体内 卵泡环境的牛和绵苇卵母细胞体外培养模型，利用牛和绵羊卵母细胞体外无血清培养技术， 研究在小鼠和猪体外成熟的过程中己证明的生理性抑制剂一次黄嘌呤(I-IX)对牛和绵羊卵 母细胞体外成熟的抑制作用。牛和绵羊卵丘卵母细胞复合体(COCs)培养在HX培养液中， 对照组培养在M．199基础培养液中，培养不同时间、旃以不同处理后，观察卵母细胞核成 熟情况。结果为：培养在FIX培养液的牛或绵羊COCs比对照组的COCs恢复减数分裂晚； 牛COCs培养8、12小时实验组与对照组的GV(生发泡)率差异极显著(Po．01)；绵羊COCs 培养8、12小时实验组与对照组的GV率差异极显著(P0．01)：绵羊COCs培养于不同浓度 (o、2、4、6mM)HX培养液，24h后88．”士1．19％以上的卵母细胞恢复减数分裂，各实验 组与对照组之间Gv率无显著差异(P0．05)；绵羊COCs在添加200Au几FSH的4mmol／L 次黄嘌呤培养液中培养24小时，GV率无显著差异(Po-05)．上述结果表明：HX仅能部 分抑制体外培养的牛、绵羊卵母细胞的自发成熟，该作用具有时间性，可见，HX并非是牛 和绵羊卵母细胞成熟过程中的生理性抑制物。 实验三磷酸二酗酶亚型在绵羊卵母细胞减数分裂过程中的作用：绵羊的卵母细胞采用 体外无血清培养方法，研究水解cAMP的磷酸二酯酶3型(PDE3)抑制剂milrinone、专一 性水解cAh／lP的PDFA抑制剂rolipram和水解eGMP的PDE5抑制剂zaprinast对绵羊卵母 细胞自发成熟和促性腺激素诱导成熟的影响。结果表明：(1)PDE3抑制剂milrinone能显著 抑制绵羊COCs体外的自发成熟；而FDFA抑制剂rolipram和PDE5抑制剂zaprinast对绵羊 COCs体外的自发成熟没有影响：这三种抑制剂对绵羊裸卵体外的自发成熟与对照组相比没 有显著差异：(2)无论采卵液中含有PDE3抑制剂milrinone还是PDE4抑制剂mlipram， mildnone均能抑制绵羊COCs体外的自发成熟；而rolipram对绵羊的采卵液是PDE3抑制剂 milrinone还是PDE4抑制剂rolipram无关，其对绵羊COCs体外的自发成熟没有影响；采卵 液舍PDFA抑制剂mlipram时，milrinone能够抑制绵羊裰卵的体外自发成熟；当采卵液含 V PDE3抑制剂milrinone时，mildnone对绵羊裸卵的体外自发成熟没有影响：(3)PDE3抑制 PDE3抑制剂milrinone时，mildnone对绵羊裸卵的体外自发成熟没有影响：(3)PDE3抑制 剂milfinone能显著抑制FSH诱导的绵羊COOs体外的自发成熟：PDE4抑制剂rolipmm不 影响FSH诱导的绵羊COCs体外的自发成熟；(4)经PDE3抑制剂mildnone培养7小时的 绵羊coCs，mildnone的抑制效应不能被FSH彻底解除：(5)PDE3抑制剂milfinone和PDE4 抑制剂rolipram培养7小时的绵羊COCs，经FSH作用17小时后皮层颗粒大多迁移到达皮 质区，表明PDE参与调控的cAMP信号通路没有影响皮层颗粒的迁移。上述结果表明：PDE3 是参与绵羊卵母细胞体外成熟过程中主要的磷酸二酯酶亚型。 实验四细胞周期蛋白抑制剂对绵羊卵母细胞体外自发成熟的影响：选用磷酸二酯酶3 (PDE3)特异性