临床分离大肠埃希菌的耐药性及分子生物学研究-内科学(传染病)专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 10 缩略词表 缩略词 英文全称 中文全称 E.coli PMQR Escherichia coli plasmid mediated quinolone resistance 大肠埃希菌 质粒介导喹诺酮耐药 BLA ESBLs  β-lactamases Extended-spectrum β-lactamasesi β-内酰胺酶 超广谱 β-内酰胺酶 CLSI Clinical and Laboratory Standard Institute （美国）临床实验室标准协会 CAZ Ceftazidime 头孢他啶 CTX cefotaxime 头孢噻肟 CIA Clavulanic acid 环丙沙星 CHL Chloramphenicol 氯霉素 ATM aztreonam 氨曲南 AMK FEP GEN  Amikacin Cefepime gentamicin 阿米卡星 头孢噻肟 庆大霉素 IMP CIP PIP Imipenem Ciprofloxacin Piperacillin 亚胺培南 环丙沙星 哌拉西林 LVX Levofloxacin 左氧氟沙星 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 MIC Minimal inhibitory concentration 最低抑菌浓度 gryA parC DNA gyrase A Subunit topoisomerase IV C Subunit DNA 旋转酶 A 亚单位 拓扑异构酶 IV C 亚单位 临床分离大肠埃希菌的耐药性及分子生物学研究 摘要 目的: 对临床分离大肠埃希菌进行体外抗生素的敏感实验和检测产超广谱 β-内酰 胺酶(Extended-spectrum β-lactamases ESBLs)株阳性率，了解本地区大肠埃希菌的耐药 性和产 ESBLs 菌株分布及其表型，分析 ESBLs 阳性菌株与非产 ESBLs 菌株的耐 药性差异；并检测试验菌株中 qnr 基因的分布，调查 qnr 阳性菌株中产 ESBLs 的 情况，研究 qnr 基因克隆流行传播情况。 方法:采用琼脂平皿稀释法对临床分离 183 株大肠埃希菌进行体外抗菌药物敏感性 测定，双纸片确证实验检测 ESBLs 并分析其耐药表型，采用 SPSS13.0 软件进行统 计分析产 ESBLs 株与非产 ESBLs 株的耐药差异性。用聚合酶链反应（PCR）方法 扩增 qnr 基因，PCR 产物纯化测序并在 Genbank 上比对测序结果，明确 qnr 基因 类别；通过转移结合实验转染质粒，并测定受体菌及结合子的最低抑菌浓度（MIC）； 及其产 ESBLs 情况；碱性裂解法提取质粒；应用 ERIC-PCR 及质粒酶切图谱分析 qnr 阳性株及质粒克隆流行传播情况。 结果: 大肠埃希菌对各种抗菌药物的耐药率分别为：哌拉西林（84.0%）头孢呋辛 （84.0%），头孢唑啉（84.9%），头孢噻肟（73.2%），头孢他啶（44.3%）头孢吡 哦（51.0%）环丙沙星（84.6%），左氧沙星（80.7%），加替沙星（77.4%）亚胺培 南（0%）阿米卡星（28.5%）庆大（78.0%）氨曲南（51.1%）氯霉素（61.5%）； 大肠埃希菌中产 ESBLs 菌株的发生率为 67.2%，以 CTX 表型为主。产 ESBLs 菌 株对多种抗菌药物的耐药率显著高于非产 ESBLs 菌株 P(0.05)。共检出 7 株菌株 含有 qnr 基因，3 株 qnrA1，1 株 qnrB2，3 株 qnrS1，其中的 5 株检出产 ESBLs， 转移结合实验成功率为 57.1%（4/7），结合子对喹诺酮类药物的敏感性有所下降； ERIC-PCR 以及质粒酶切产物电泳结果示没有一致条带。 结论: 本地区的大肠埃希菌对多种抗菌药物呈高耐药性，与非产 ESBLs 菌株相比 产 ESBLs 菌株的高耐药率及多重耐药性更为明显，临床应加强对大肠埃希菌的耐 药性检测，准确诊断感染，合理使用抗生素，并防治耐药菌株的传播流行。我院 大肠埃希菌 qnr 基因的检出率较之前研究有上升趋势，qnr 基因阳性株中 ESBLs 的百分比较高，并且 ESBLs 基因能同 qnr 基因同时传播，两者常有协同作用能显 著提高对喹诺酮的耐药性，同时使得 qnr 基因阳性菌株有严重的多重耐药性。我 院检测出的 qnr 基因阳性株无同源性。 关键词 超广谱 β-内酰胺酶；耐药性；大肠埃希菌；qnr 基因 Part Ⅰ Investigate the drug resistance and molecular biology of Escher